荷叶生物碱类物质降脂减肥活性研究

摘要

目前，关于荷叶生物碱类物质具有降脂减肥生理功能的研究报道很多，主要集中在荷叶总生物碱粗提物方面，而且功能评价体系大多单一从体内试验或体外试验方面开展，采用的试验模型只是选择具有相关某种疾病缺陷动物模型，或者只是选择脂肪酶或脂肪细胞，但是对荷叶生物碱单体降脂减肥体内体外综合作用效果及其相关机制的研究甚少。
　　 本文拟采用课题组前期研究获得的荷叶总生物碱提取、分离和纯化方法，得到荷叶总生物碱，采用高速逆流色谱和制备型液相色谱分离纯化得到荷叶生物碱单体物质，进一步分别从体内、体外试验探究荷叶总生物碱及其单体物质的降脂减肥效果，以期为荷叶开发降脂减肥食品或保健品提供理论支持。
　　 本论文的主要研究成果包括以下几个方面：
　　 (1)荷叶总生物碱以及四种荷叶生物碱单体的制备和含量测定。荷叶粉末用75％酸性乙醇(pH为5.0)溶液超声提取(超声功率400W，温度60℃，，时间60min)后，经4%氨水(pH为10.0)沉淀后，滤液经氯仿萃取，萃取液用0.45μm滤膜精制纯化后旋干，得到荷叶总生物碱提取物，其中荷叶总生物碱含量为72.3%左右。参照课题组前期研究获得的图谱资料以及分离条件，荷叶总生物碱提取物再进一步通过高速逆流色谱、制备型HPLC色谱分离后，确定得到了4种荷叶生物碱单体，纯度均在90%以上。
　　 (2)建立高脂血症大鼠实验模型，给予高脂血症大鼠模型组不同剂量荷叶总生物碱，阳性药物组降脂药物辛伐他汀，通过观察荷叶总生物碱对高脂血症大鼠体质量、体脂以及血清脂质相关指标的影响来评价其降脂减肥作用。结果显示：荷叶总生物碱具有较明显的降脂减肥作用。高脂血症大鼠给药40天后，反映机体肥胖程度的增长指标如Lee's指数、体脂及血脂水平都有不同程度地下降。随着荷叶总生物碱剂量的增多，大鼠的体质量、各内脏质量、Lee's指数、体脂系数下降越明显，高剂量组的降低效果最接近于药物组。中剂量组的大鼠血清TC、TG、LDL，AI、ALT和AST水平都有显著降低，效果也接近于药物组，中剂量荷叶总生物碱对HDL有显著的升高趋势，其效果比药物组突出。因此，我们可以确信，荷叶总生物碱具有控制体重，预防肥胖，调节脂代谢紊乱的功效。
　　 (3)对硝基苯酚法检测荷叶总生物碱及四种荷叶生物碱单体对胰脂酶活性的影响，并考察温度、pH、抑制剂质量浓度对胰脂酶抑制效果的影响，分析荷叶总生物碱对胰脂酶的抑制类型。结果显示：四种荷叶生物碱单体对胰脂酶活性的抑制效果是荷叶碱和N-去甲基荷叶碱相仿，O-去甲基荷叶碱和巴婆碱的效果相仿，并且O-去甲基荷叶碱的抑制效果略好于巴婆碱，且四种单体的抑制效果都呈现出剂量效应。四种单体对胰脂酶活性的抑制作用在反应体系的温度上表现一致，反应体系的温度在37℃时，不同的抑制剂对胰脂酶活性的抑制作用都最大，低于或高于37℃，抑制率都下降，呈现典型的倒V形或倒U形曲线，但是四种单体对胰脂酶活性的抑制作用在体系的pH上表现出差异，荷叶总生物碱、荷叶碱、N-去甲基荷叶碱在pH7.4时对胰脂酶活性的抑制效果比较好，O-去甲基荷叶碱和巴婆碱在pH7.2时对胰脂酶活性的抑制效果比较好。
　　 (4)MTT法检测不同质量浓度荷叶总生物碱及荷叶碱对3T3-L1前脂肪细胞增殖的影响。结果显示：荷叶总生物碱以及荷叶碱能明显抑制3T3-L1前脂肪细胞的增殖，且其抑制作用具有时间和浓度依赖性。随荷叶总生物碱以及荷叶碱质量浓度的增加以及荷叶总生物碱和荷叶碱作用时间的延长，对3T3-L1前脂肪细胞增殖的抑制率也会增加。