鸭L-FABP、A-FABP基因多态性与肌内脂肪含量的相关性及其对脂肪代谢相关基因表达的影响

摘要

脂肪酸结合蛋白(FABPs)是细胞内脂质结合蛋白(iLBs)中的一类成员。FABPs是一类分子量约12-15 kDa的细胞溶质蛋白，对长链脂肪酸有高度的亲和性，在动物体内对脂肪酸和它们的CoA衍生物的摄取、胞内转运、脂化、氧化以及合成均有重要作用。不同类型的FABPs在不同的组织中发挥生物功能。本试验选取鸭肝脏型L-FABP和脂肪细胞型A-FABP，克隆其基因序列，检测外显子上的SNPs，并分析其与肌内脂肪IMF含量的相关性。用荧光定量方法检测该两基因在不同组织中的表达情况，并运用RNAi方法分别研究其在鸭肝细胞和脂肪细胞中对脂肪代谢相关基因的调控作用，以及油酸对该调控作用的影响。主要结果如下:
　　 1.鸭L-FABP与A-FABP基因序列的获得
　　 经克隆测序得到了鸭L-FABP与A-FABP基因的序列。获得的鸭L-FABP基因序列长度为2，542 bp，包含4个外显子和3个内含子，其中CDS序列分别为52→118 bp，1，113→1，285 bp、1，581→1670 bp，2，421→2，471 bp，共编码126个氨基酸，此结果已上传GenBank(Accession No.: HQ640427);获得的鸭A-FABP基因序列长度为3，338bp，包含4个外显子和3个内含子以及部分5’端序列，其中CDS序列分别为205→277 bp，1，539→1，711 bp、1，929→2，030 bp，3，288→3，338bp，共编码132个氨基酸，此结果已上传GenBank(Accession No.: HQ640428)。
　　 2.SNPs的检测及其与IMF含量的相关性分析
　　 在鸭L-FABP外显子3上发现1个SNP(:)HQ640427(:)g.1953C＞T，并发现其与胸肌的IMF含量以及其中棕榈酸和亚麻酸的含量呈显著相关性;在鸭A-FABP基因的外显子3上发现2个SNPs(:) HQ640428(:)g.1991T＞C和HQ640428(:)g.2018A＞G，其中HQ640428(:)g.2018A＞G的多态性与胸肌IMF含量以及其中硬脂酸、亚油酸和亚麻酸的含量呈显著相关性。本试验检测到的SNPs之间无连锁交互关系。
　　 3.鸭L-FABP和A-FABP基因在各组织中的表达丰度
　　 应用荧光定量PCR法检测了鸭L-FABP和A-FABP基因在所选的15个组织中的表达情况。发现鸭L-FABP基因在肝脏中高度表达，且在除胰腺和脾脏外的其它多种组织中均有表达;鸭A-FABP基因在脂肪组织中高度表达，且在除胰腺、肺和肾脏外的其它多种组织中均有表达。
　　 4.鸭L-FABP在肝细胞及A-FABP在脂肪细胞中的调控作用
　　 本试验用RNAi方法对鸭肝细胞L-FABP基因进行knockdown，发现其表达量降低了58.7％，同时FAS、LPL和PPARα基因的表达量也均显著下调，油酸的刺激可以缓解这种抑制作用，但LEPR和PPARγ表达量无显著变化;当对鸭脂肪细胞A-FABP基因进行knockdown后，发现其表达量降低了77.0％，FAS、LEPR、LPL和PPARγ基因的表达量也均显著下调，油酸的刺激可以缓解这种抑制作用，但PPARα基因表达量却无显著变化。这表明该两基因对脂肪相关基因的表达具有一定的调控作用。
　　 从结果中可以看出，鸭L-FABP和A-FABP基因多态性均与胸肌脂肪含量具有显著相关性，在其他多种组织均有表达，且在脂肪代谢中具有重要的调控作用，能影响多种脂肪代谢相关基因的表达。

目录

声明

致谢

摘要

缩略词

第一章 文献综述

第一节 脂肪代谢相关基因的研究进展

1．1 FABPs基因

1．2 其它脂代谢相关基因

1．3 前景与展望

第二节 SNP检测技术研究进展

2．1 SNP区分方法

2．2 检测分析方法

2．3 小结与展望

第三节 动物脂肪细胞培养的研究现状

3．1 人与鼠脂肪细胞的培养

3．2 其它动物脂肪细胞的培养进展

3．3 前体脂肪细胞的培养

3．4 前脂肪细胞的诱导分化

3．5 小结与展望

第四节 肝细胞分离与培养的研究进展

4．1 肝细胞的分离技术

4．2 主要物种肝细胞分离进展

4．3 原代肝细胞的培养

4．4 小结与展望

第五节 RNA干扰的研究与应用

5．1 RNAi的原理

5．2 RNAi的应用

5．3 小结与展望

第二章 鸭L-FABP基因序列的克隆及其多态性与IMF等脂肪性状的相关性

第一节 鸭L-FABP基因DNA序列的克隆

1．1 引言

1．2 材料与方法

1．3 结果与分析

1．4 讨论

第二节 鸭L-FABP基因SNP检测及其与IMF含量的相关性

2．1 引言

2．2 材料与方法

2．3 结果与分析

2．4 讨论

第三章 鸭A-FABP基因序列的克隆及其多态性与IMF等脂肪性状的相关性

第一节 鸭L-FABP基因DNA序列的克隆

1．1 引言

1．2 材料与方法

1．3 结果与分析

1．4 讨论

第二节 鸭A-FABP基因sNP检测及其与IMF含量的相关性

2．1 引言

2．2 材料与方法

2．3 结果与分析

2．4 讨论

第四章 鸭L-FABP基因在各组织中的表达丰度及其在肝细胞中对脂肪代谢相关基因的调控作用

第一节 鸭L-FABP基因在各组织中的表达丰度研究

1．1 引言

1．2 材料与方法

1．3 结果与分析

1．4 讨论

第二节 鸭肝细胞的分离与体外培养

2．1 引言

2．2 材料与方法

2．3 结果与分析

2．4 讨论

第三节 鸭L-FABP对肝脏脂肪代谢相关基因的调控研究

3．1 引言

3．2 材料与方法

3．3 结果与分析

3．4 讨论

第五章 鸭A-FABP基因在各组织中的表达丰度及其在脂肪细胞中对脂肪代谢相关基因的调控作用

第一节 鸭A-FABP基因在各组织中的表达丰度研究

1．1 引言

1．2 材料与方法

1．3 结果与分析

1．4 讨论

第二节 鸭脂肪细胞的分离与体外培养

2．1 引言

2．2 材料与方法

2．3 结果与分析

2．4 讨论

第三节 鸭A-FABP基因对脂肪细胞中脂代谢相关基因的调控研究

3．1 引言

3．2 材料与方法

3．3 结果与分析

3．4 讨论

第六章 小结、创新点与展望

6．1 小结

6．2 创新点

6．3 研究展望

参考文献

作者简历及其在学期间所取得的科研成果