miR-224靶向RASSF8在宫颈癌进展中的作用及其机制研究

摘要

目的:
　　验证miR-224在宫颈癌组织中表达上调，并明确miR-224对宫颈癌细胞生物学行为的作用及调控机制。
　　方法:
　　采用Stem-loop RT-PCR法检测148例宫颈鳞癌组织和64例宫颈正常上皮组织的miR-224的表达水平，收集整理临床病理资料，分析miR-224的表达水平与宫颈癌临床不良预后因素的相关性。
　　在宫颈癌细胞株Siha和CaSki中，利用细胞转染技术过表达miR-224以及siRNA干扰RASSF8的表达，利用MTT法检测细胞增殖能力，流式细胞技术检测细胞周期分布，划痕试验和Transwell侵袭试验检测细胞的迁移和侵袭能力，并利用Real timeRT-PCR和Western Blot的方法检测宫颈癌组织中RASSF8的mRNA和蛋白水平，最后利用双荧光素酶报告基因的方法确认miR-224与RASSF8靶向关系
　　结果:
　　1.miR-224在宫颈鳞癌组织的表达水平与宫颈正常上皮组织相比显著下调。miR-224高表达组有更高的FIGO分期、更大的肿瘤体积，更易于发生盆腔淋巴结转移、深间质浸润、以及脉管浸润。
　　2.在宫颈癌细胞株中，过表达miR-224可增加Siha和CaSki细胞的增殖能力，促进细胞划痕的愈合和细胞的侵袭并且下调RASSF8的蛋白水平，但是对周期以及凋亡无明显影响。
　　3.宫颈癌组织中RASSF8的表达量明显低于正常宫颈组织。
　　4.miR-224可下调含RASSF83'UTR区报告质粒荧光素酶的活性，而不影响3'UTR区突变报告质粒的荧光素酶活性。
　　5.在宫颈癌细胞中，干扰RASSF8的表达可促进Siha和CaSki细胞的迁移和侵袭能力但是对增值无影响。
　　结论:
　　1.miR-224的表达水平在宫颈癌组织与正常组织相比显著上调并且miR-224高表达与宫颈癌预后不良因素相关.
　　2.miR-224表达上调参与了宫颈癌的进展过程，miR-224通过靶向RASSF8调控宫颈癌细胞的生物学功能。