甜叶菊抗氧化能力测定技术研究和种质资源筛选

摘要

甜叶菊作为天然甜味剂和添加剂已广泛用于饮料、食品以及饲料等领域中。近年来，国内外对甜叶菊的研究主要集中在甜菊糖甙的提取和应用方面。但同时，甜叶菊叶片的提取物也含有黄酮类、多酚化合物、氨基酸、脂类、挥发油和微量元素等，这些提取物具有一定的抗氧化活性。因此本研究对甜叶菊叶片总黄酮含量、多酚含量和DPPH(1，1-Dipheny1-2-picrylhydrazy1 radical2，2-Dipheny1-1-(2，4，6-trinitropheny1) hydrazy1)清除率的测定方法和技术进行了研究，同时也筛选了种质资源，为培育高抗氧化甜菊新品种打下基础。
　　总黄酮含量的测定采用亚硝酸钠-硝酸铝(NaNO2-Al(NO3)3)比色法，经优化处理，采用取称量0.1g样品，取提取液1.0mL进行反应和比色比较合适，优化所得比色方法的相对标准偏差(RSD)为1.08％;多酚的测定采用福林酚比色法，比色体系经优化发现:采用1.5mL1mol/L福林酚试剂，与12％碳酸钠溶液的比例为1∶2时为最佳，经优化后分析方法的RSD为1.22％;总抗氧化活性采用的是DPPH法测定的，DPPH自由基清除率的大小表示所测样品抗氧化活性的高低，其RSD为0.91％。这些结果表明研究所得比色体精密度较高，重现性较好，同时比色法具有操作简单，设备要求低，因此适用于甜叶菊叶片中总黄酮、多酚含量和DPPH自由基清除率的测定，可以为甜叶菊抗氧化方面的开发利用提供一定的依据。
　　在实际育种中往往是从大批量的材料中选出所需的较优的品种，而近红外光谱技术具有快速、高效、无污染、无损耗、可同时测定多组分等优点。因此研究收集569份材料的近红外光谱，从中选出307份具有代表性的甜叶菊样品，用研究所得适宜的比色法测定其总黄酮含量、多酚含量和DPPH清除率，建立了总黄酮、多酚含量和DPPH清除率的定标模型。结果发现采用数学处理“1，4，4，1”对于总黄酮和多酚含量近红外定标效果最好。在散射处理中，对总黄酮来说，散射处理呈过拟合状态，效果反而不如对照。对于多酚含量，SNV和SMSC结合“1，4，4，1”方法的1-VR值均为0.947，而RPD值相对较高，分别为4.342和4.336。但是，总体上来说5种处理方法组合都没有对照组的定标效果好。因此选择对照处理建立甜叶菊总黄酮和多酚的定标模型较合适。在回归方法的比较中，对总黄酮来说，偏最小二乘法(PLS)定标效果最好，其SECV值30.696最小，1-VR值0.788最大，其外部检验效果也不错。而对于多酚来说，改良的偏最小二乘法(MPLS)定标的效果最佳，其SECV值2.936最小，1-VR值0.942最大。但总体上，对DPPH清除率，5种处理方法和对照的1-VR值都在0.2左右，小于1。表明对DPPH清除率来说定标效果都不是很理想。
　　利用所建模型对1032份甜叶菊样品进行预测筛选，预测得到这些甜叶菊样品中每个品种总黄酮和多酚含量，变化范围分别为130.156-435.731 mg/g和28.960-95.170mg/g。从中分别筛选出了27个总黄酮和多酚含量高的甜叶菊品种，为甜叶菊的高抗氧化活性品种的选育提供了一定的依据。