去细胞肝脏支架诱导T细胞凋亡抑制T细胞激活

摘要

目的： 肝脏具有免疫特惠的作用，但其机制至今尚不明确。众多研究认为肝脏内的实质细胞和非实质细胞与肝脏免疫特惠功能相关，但是基于去细胞的肝脏支架研究肝脏免疫特惠在国内外都属于空白水平。本研究通过去细胞化肝脏支架的肝脏免疫微环境研究肝脏免疫特惠的功能。 方法： 建立以Babl/c和C57BL6小鼠为背景的去细胞肝脏支架方案。检测去细胞支架本身生物学活性，有无细胞和细胞核的残留，细胞外基质保存情况，去细胞肝脏支架免疫原性。由此获得的小鼠去细胞肝脏支架用于体外培养。在特异性T细胞激活、同种异型T细胞激活培养体系，分别加入去细胞肝脏支架，观察去细胞肝脏支架对T细胞激活的抑制功能。体内利用胰岛移植模型观察去细胞支架对同种非肝源性的组织移植物的保护能力。 结果： (1)成功获得去细胞肝脏支架，去细胞肝脏支架无细胞或细胞核的残留; (2)免疫荧光显示去细胞化的肝脏支架保留了Ⅰ型胶原、Ⅳ型胶原、纤连蛋白和层粘连蛋白，电镜扫描显示，去细胞化的肝脏支架维持了原器官的3D结构。 (3)去细胞的肝脏支架无MHCI和MHCII分子的残留，无核的残留，具有极低的免疫原性 (4)去细胞化的肝脏支架能有效诱导T细胞凋亡，抑制T细胞激活; (5)去细胞化的肝脏支架与胰岛共移植在同种异基因小鼠肾包膜下能有效改善移植物的存活。 结论： (1)去细胞化的肝脏支架在肝脏免疫耐受中扮演着重要角色; (2)去细胞化的肝脏支架通过促进T细胞凋亡抑制T细胞激活来实现其免疫调控功能; (3)去细胞化的肝脏支架能保护同种异基因胰岛移植，改善胰岛血糖和移植物胰岛存活率; (4)去细胞化的肝脏支架在未来能被当做免疫抑制材料应用于其他移植。

目录

声明

致谢

摘要

缩略词表

1．1前言

1．2材料与方法

1．2．1主要实验仪器设备

1．2．2小鼠肝脏去细胞技术

1．2．3糖尿病小鼠模型的制备

1．2．4小鼠脾脏单细胞悬液制备

1．2．5小鼠CD4+细胞分离

1．2．6小鼠CD62L+细胞分离

1．2．7小鼠树突状细胞体外诱导模型

1．2．8小鼠CD11c+树突状细胞分离

1．2．9小鼠胰岛细胞分离

1．2．10 同种异基因小鼠胰岛细胞移植

1．2．11淋巴细胞混合培养体系

1．2．12 同种异基因T细胞激活反应

1．2．13去细胞肝脏支架病理学检测

1．2．14免疫组织荧光染色

1．2．15细胞培养上清液TNF-a测定

1．2．16细胞培养上清液IL-2测定

1．2．17细胞培养上清液IFN-γ测定

1．2．18肝脏去细胞支架电镜扫描

1．2．19 流式细胞检测CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞

1．2．20流式细胞检测T细胞凋亡

1．2．21统计分析

1．3结果

1．3．1 去细胞肝脏支架的生物学特性

1．3．2 去细胞肝脏支架保留了肝脏的细胞外基质和3D结构

1．3．3 去细胞肝脏支架具有极低的免疫原性

1．3．4 去细胞肝脏支架能有效抑制T细胞激活

1．3．5去细胞肝脏支架能有抑制同种异基因T细胞反应

1．3．6 去细胞肝脏支架改善胰岛移植物的存活

1．4讨论

1．5结论

参考文献

综述一

综述二

作者简历及在学期间所取得的科研成果