超抗原SEB激活诱导CD4^(+)T细胞凋亡模型的建立

摘要

目的为了探讨超抗原活化诱导 CD4+ T淋巴细胞凋亡分子机理及其信号传导途径 ,有必要建立超抗原活化诱导 CD4+ T细胞凋亡模型。方法采用电镜观察细胞凋亡的形态学特征 ,借助流式细胞仪 PI染色观察细胞凋亡的光散射特征及亚二倍体核型峰特征 ,琼脂糖凝胶电泳分析细胞凋亡的 DNA片段化图谱 ,最后采用改进的二苯胺 (DPA)法定量分析细胞凋亡 DNA片段化百分率。结果 4μg/ m L SEB刺激静息的 SEB应答 CD4+ T细胞 12 h后 ,电镜下观察呈现典型的凋亡形态学特征 ;流式细胞仪 PI染色分析表明 ,在二倍体峰的左侧出现亚二倍体核型峰典型凋亡特征 ,在光散射图谱上呈现低于正常细胞的前向散射和高于正常细胞的侧向散射 ;琼脂糖凝胶电泳分析呈现典型的凋亡 DNA梯状图谱 ;DNA片段化百分率分析表明 ,超抗原 SEB活化诱导 CD4+ T细胞凋亡率的升高具有时间依赖性 ,添加 Fas- Ig融合蛋白能够特异性抑制凋亡 DNA片段化百分率的升高。结论超抗原 SEB活化诱导 CD4+ T细胞凋亡模型的建立 ,为进一步深入探讨超抗原活化诱导