雷公藤甲素通过抑制逆转录病毒HERV-K Np9基因转录诱导人K562和Jurkat白血病细胞凋亡

摘要

目的:
　　1、明确HERV-K Np9病毒基因在白血病细胞系和原代白血病细胞中的转录水平。
　　2、探讨雷公藤甲素(TPL)对人K562和Jurkat白血病细胞HERV-K Np9基因转录及其下游信号分子影响。
　　3、探讨雷公藤甲素诱导K562和Jurkat白血病细胞凋亡与其抑制Np9转录相关性。
　　方法:
　　1、以(0.5-64nmol/L)浓度雷公藤甲素(TPL)分别处理Jurkat, K562，K562/ADR，Raji，NB4，KM3，CML-BC，KU812，KG-1，THP-1，Kasumi-1，KCL-22细胞72h和临床白血病病人样本48h，然后用MTT法检测细胞存活率并计算出相应的半数增殖抑制浓度(IC50)值。
　　2、半定量RT-PCR检测12种血液肿瘤细胞系和临床样本中HERV-K Np9的表达情况。
　　3、按照0，2，4，8，16nmol/L浓度雷公藤甲素处理Jurkat和K562细胞48h，流式细胞仪检测它们凋亡细胞的变化。
　　4、半定量RT-PCR检测加雷公藤甲素处理Jurkat和K562细胞以及原代病人样本后，各组Np9基因mRNA的表达水平变化，并用Kodak1D3.6软件进行定量分析。
　　5、采用统计软件SPSS19.0分析雷公藤甲素对Np9基因转录抑制与细胞凋亡之间的相关性。
　　6、应用Western blot检测加雷公藤甲素后Jurakt和K562细胞中Np9下游信号分子c-myc，β-catenin，p-ERK，p-Akt和Notch1蛋白水平的变化情况。
　　7、应用Western blot检测经雷公藤甲素处理后Jurakt和K562细胞中凋亡相关分子PARP，caspase-3表达水平变化
　　结果:
　　1、雷公藤甲素呈剂量依赖方式抑制Jurkat，K562，K562/ADR，Raji，NB4，KM3，CML-BC，KU812，KG-1，THP-1，Kasumi-1和KCL-2212种血液系统肿瘤细胞的增殖，其半数增殖抑制浓度(IC50)在1.4 nmol/L到27.1 nmol/L之间。雷公藤甲素对于5例临床白血病病人样本原代白血病细胞也有明显的增殖抑制作用，其半数增殖抑制浓度(IC50)在9.13-29.2nmol/L之间。
　　2、在12种血液系统肿瘤细胞系中，Jurkat，K562，K562/ADR, KM3细胞和临床样本中高表达Np9基因mRNA。
　　3、雷公藤甲素能显著诱导Jurkat和K562细胞凋亡，并呈剂量依赖性。
　　4、雷公藤甲素处理Jurakt和K562细胞后，Np9转录水平随着雷公藤甲素作用浓度的增高而下降。雷公藤甲素也下调临床病人样本中Np9转录水平。
　　5、经统计分析发现雷公藤甲素对白血病细胞Np9基因转录抑制水平与其诱导的细胞凋亡之间具有显著相关性。其中Jurkat细胞R2=0.907，K562细胞R2=0.987。两组p值均＜0.05。
　　6、雷公藤甲素抑制白血病细胞Np9基因转录水平的同时，平行下调其下游与白血病细胞增殖相关的信号分子c-myc，β-catenin，p-ERK, p-AKT和Notch1的蛋白水平。
　　7、雷公藤甲素呈剂量依赖方式诱导Jurkat和K562细胞活化的PARP和活化的caspase-3表达上升。
　　结论:
　　1、雷公藤甲素呈剂量依赖方式抑制多种血液肿瘤细胞系和原代白血病细胞的增殖。
　　2、HERV-K Np9基因mRNA在一些白血病细胞系和原代白血病细胞样本中呈高表达状态。
　　3、雷公藤甲素抑制白血病细胞Np9基因转录与其诱导细胞凋亡之间具有显著相关性，提示抑制Np9转录可能是雷公藤甲素诱导Jurkat和K562细胞凋亡的重要分子机制之一。
　　4、雷公藤甲素抑制白血病细胞Np9基因转录同时，平行下调其下游多个与白血病细胞增殖相关的信号分子，如c-myc，β-catenin，p-ERK，p-Akt和Notch1蛋白。
　　5、HERV-K Np9可能是一个新的白血病治疗的潜在靶点，而雷公藤甲素可能是一种新的HERV-K Np9病毒基因转录抑制剂。

目录

声明

致谢

摘要

缩略词

引言

材料和方法

一、实验材料

2、实验方法

实验结果

1、TPL对Jurkat，K562，K562／ADR，Raji，NB4，KM3，CML-BC，KU812，KG-1，THP-1，Kasumi-1，KCL-22细胞及临床样本原代白血病细胞的增殖抑制效果

2、Np9在12种血液系统肿瘤细胞系和临床样本中的表达的情况

3、TPL诱导Jurakt和K562细胞凋亡的情况

4、半定量RT-PCR检测加药处理Jurkat和K562细胞以及原代病人样本后，各组Np9基因mRNA的表达水平变化

5、Np9转录抑制与细胞凋亡的相关性

6、Np9下游信号分子c-myc，β-catenin，p-ERK，ERK，p-AKT，AKT和Notch1蛋白的变化

7、TPL处理之后在Jurkat和K562细胞中活化的PARP和活化的caspase-3表达水平上升

讨论

结论

参考文献

综述 雷公藤甲素抗肿瘤的研究进展

作者简历