C-Myc调节低氧微环境下结肠癌细胞的5-氟尿嘧啶敏感性试验

摘要

目的：结肠癌是西欧、北美等发达国家最常见的恶性肿瘤，也是我国九大常见恶性肿瘤之一。在过去30多年的时间里，包括我国在内的多数国家或地区结肠癌发病率呈上升趋势。以5-氟尿嘧啶(5-Fu)为基础的化疗有效降低了结肠癌患者的死亡率，但对5-氟尿嘧啶敏感性下降却给结肠癌的化疗带来了新的挑战和困难。另外，随着结肠癌肿瘤快速生长将不可避免发生肿瘤中心区的坏死和低氧状态，这种低氧微环境也将降低肿瘤细胞的化疗敏感性。我们前期另外研究结果发现，慢性低氧微环境下，在低氧诱导因子和泛素化的调节下，结肠癌细胞中c-Myc的表达明显下降，提示低氧环境中c-Myc的表达可能与肿瘤敏感性有关。本课题采用现代细胞与分子生物学技术，阐明低氧微环境下结肠癌细胞株5-氟尿嘧啶的敏感性下降的现象，并通过建立过表达c-Myc的结肠癌细胞系，了解结肠癌细胞过表达c-Myc与对5-氟尿嘧啶敏感性的关系。
　　方法：⑴检测常氧和低氧环境下不同浓度梯度5-Fu对结肠癌细胞的抑制率，计算IC50，比较常氧和低氧下不同浓度5-Fu作用于结肠癌细胞敏感性的差异。⑵选择结肠癌细胞株RKO，稳定转染c-Myc质粒或外源性添加泛素化抑制剂MG132，观察慢性低氧微环境下5-氟尿嘧啶敏感性的影响，并分析其可能机制。
　　结果：①结果提示低氧(1％O2)培养条件下，5-Fu对结肠癌细胞（包括HT29，HCT116，SW480，SW620，RKO和Lovo）作用的IC50较常氧(21％ O2)培养时显著升高。②c-Myc表达水平与5-Fu药物敏感性相关，稳定转染c-Myc的结肠癌细胞RKO细胞中c-Myc表达明显增加，伴随着5-Fu化疗敏感性的增强。③0.1uM泛素化抑制剂MG132加入RKO细胞后c-Myc表达增加，低氧下结肠癌细胞对5-Fu敏感性亦增强。
　　结论：⑴低氧比较常氧条件下，结肠癌细胞（包括HT29，HCT116，SW480，SW620，RKO，Lovo）对5-Fu的敏感性下降。⑵c-Myc基因表达水平与结肠癌细胞低氧条件下对5-Fu敏感性有关，过表达c-Myc基因或使用抑制泛素-蛋白酶体降解药物MG132可提高细胞周期化疗药物5-Fu的增敏作用。

目录

声明

致谢

摘要

前言

第一部分 低氧下结肠癌细胞对5-Fu敏感性的影响

1．材料和方法

1．1 主要试剂与仪器

1．2 细胞培养

1．3 研究方法和手段

2．结果

3．讨论

4．结论

第二部分 结肠癌细胞稳定过表达c-Myc后对5-Fu的敏感性的影响

1．材料和方法

1．1 主要试剂与仪器

1．2 研究方法和手段

2．结果

2．1 不同结肠癌细胞株c-Myc的表达

2．2 稳定转染c-Myc的RKO细胞克隆WB结果

2．3 c-Myc稳定过表达后细胞活性变化

2．4 抑制泛素-蛋白酶体降解药物对结肠癌细胞5-Fu敏感的影响

3．讨论

4．结论

全文结论

创新点

研究不足之处

参考文献

综述 结直肠癌的新辅助化疗

作者简历及在学期间所取得的科研成果