MiR-129-5p通过靶定胸苷酸合成酶调节结肠癌细胞对5-氟尿嘧啶的敏感性

摘要

目的 研究miR-129-5p通过靶定胸苷酸合成酶(TYMS)调控结肠癌细胞对5-氟尿嘧啶(5-Fu)敏感性的分子机制.方法 构建结肠癌耐药细胞株LoVo/5-Fu,并用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测miR-129-5p的表达水平.流式细胞术和MTT毒性实验检测过表达miR-129-5p对LoVo/5-Fu凋亡和半数致死剂量(IC50)的影响.构建TYMS 3'UTR区荧光素酶报告载体,验证miR-129-5p对TYMS的靶向调控作用.Western Blot检测转染miR-129-5p后LoVo/5-Fu细胞中TYMS的蛋白表达.在LoVo/5-Fu内转染miR-129-5P siRNA,抑制其表达,检测LoVo/5-Fu细胞的IC50和凋亡.结果 过表达miR-129-5p后,LoVo/5-Fu细胞用5-Fu处理后凋亡增加,IC50降低.荧光素酶活性检测表明miR-129-5p能够抑制TYMS的荧光素酶活性.在LoVo/5-Fu细胞中miR-129-5p与TYMS的表达呈负相关.敲减TYMS后,LoVo/5-Fu细胞用5-Fu处理后凋亡增加,IC50降低.结论 MiR-129-5p能够通过靶定TYMS而增加结肠癌细胞对5-Fu的敏感性.