体外血脑屏障建立及抗生素体外血脑屏障透过研究

摘要

目的:
　　通过人脐静脉内皮细胞(HUVEC)和小鼠胶质瘤细胞(C6)共培养构建体外血脑屏障（Blood-Brain Barrier，BBB）细胞模型，选择体外抗菌活性较强而血脑屏障通透性尚不明确的新型抗生素（利奈唑胺，比阿培南，舒巴坦，替加环素）与治疗颅内感染的传统抗生素（万古霉素，美罗培南）进行药物体外血脑屏障透过实验比较其通透性，筛选合适的新型抗生素或组合为临床治疗中枢神经系统感染提供理论依据。
　　方法:
　　1、用人脐静脉内皮细胞(HUVEC)和小鼠胶质瘤细胞(C6)通过非接触式共培养构建体外血脑屏障(Blood-Brain Barrier，BBB)细胞模型，通过测定跨内皮阻抗(TEER)来评价血脑屏障(BBB)的功能。
　　2、选择体外抗菌活性较强而血脑屏障通透性尚不明确的新型抗生素（利奈唑胺，比阿培南，舒巴坦，替加环素）与治疗颅内感染的传统抗生素（万古霉素，美罗培南）经过相应处理后配置成0.05、0.1、0.2、0.4、0.6mg/ml系列浓度标准溶液。取上述系列浓度药物各20ul，加入空白培养液中分别配置成0.005、0.01、0.02、0.04、0.06mg/ml系列浓度药物，培养液经过预处理后，采用高效液相色谱检测，以药物峰面积(X)对其浓度(Y)做线性回归，求得回归方程和相关系数(R2)。向体外血脑屏障(BBB)细胞模型供体池内分别按0.05mg/ml加入上述六种药物各1ml，于培养30min、1、2、4h后分别取一部分受体池培养液，培养液经过预处理后，采用高效液相色谱检测测定实际培养液中药物浓度，将4h后实际培养液中药物浓度与初始药物浓度比较测定六种抗生素体外血脑屏障(BBB)模型透过率。
　　结果:
　　1、通过对体外血脑屏障细胞模型跨内皮阻抗(TEER)测定证明HUVEC和C6共培养可成功构建体外血脑屏障(BBB)模型，满足后续试验需要。
　　2、六种抗生素在0.005-0.6mg/ml范围内线性良好，满足实验要求。在相同实验条件下万古霉素在30min，1h，2h，4h实际培养液中浓度为0.0015mg/ml，0.0026mg/ml，0.0039mg/ml，0.0048mg/ml，4h后体外BBB透过率为9.6％。利奈唑胺在30min，1h，2h，4h实际培养液中浓度为0.003mg/ml，0.0047mg/ml，0.0075mg/ml，0.0104mg/ml，4h后透过率为20.8％。比阿培南在30min，1h，2h，4h实际培养液中浓度为0.0012mg/ml，0.0021 mg/ml，0.0028mg/ml，0.0037mg/ml，4h后透过率为7.4％。美罗培南在30min，1h，2h，4h实际培养液中浓度为0.0014mg/ml，0.002mg/ml，0.0037mg/ml，0.0052mg/ml，4h后透过率为10.4％。舒巴坦在30min，1h，2h，4h实际培养液中浓度为0.0015mg/ml，0.0027mg/ml，0.0044mg/ml，0.0051 mg/ml，4h后透过率为10.2％。替加环素在30min，1h，2h，4h实际培养液中浓度为0.0043mg/ml，0.0047mg/ml，0.0056mg/ml，0.0062mg/ml，4h后透过率为12.4％。
　　结论:
　　1、HUVEC和C6共培养可成功建立在体外能够反映血脑屏障的细胞模型。
　　2、利奈唑胺体外血脑屏障透过率较万古霉素明显升高，可作为革兰阳性菌所致颅内感染的首选。美罗培南、替加环素和舒巴坦体外血脑屏障透过率接近，超剂量替加环素可作为治疗多重耐药革兰阴性杆菌颅内感染的一种选择，而舒巴坦联合美罗培南可能成为治疗多重耐药鲍曼不动杆菌颅内感染的有效选择。

目录

声明

致谢

摘要

缩略词表

1 引文

2 材料与方法

2．1 材料和试剂

2．2 仪器

2．3 试剂配制

2．4 实验方法

3．结果与分析

3．1 HUVEC和C6共培养可成功构建体外BBB模型

3．2 六种抗生素色谱图

3．3 标准曲线

3．4 实际培养液中药物浓度

3．5 体外BBB模型中六种药物透过率

4．讨论

5 结论

参考文献

综述 体外血脑屏障建立及抗生素在颅内感染应用研究进展

作者简历及在学期间所取得的科研成果