浙江地区人巨细胞病毒糖蛋白H基因分型及其与婴儿HCMV肝炎的关系研究

摘要

人巨细胞病毒(HCMV)感染在我国儿童中相当普遍，多发生于婴儿时期。肝脏是婴儿HCMV感染的重要靶器官之一，由HCMV引起的肝脏疾病，是目前我国婴儿中最常见的一种肝脏疾病，严重影响了我国儿童的健康。HCMV大部分基因序列高度保守，但部分基因序列呈现一定的多态性，如编码包膜糖蛋白的基因。目前许多研究证实病毒基因序列多态性与其不同致病模式相关联。
　　目的：
　　本课题拟通过研究婴儿人巨细胞病毒(HCMV)临床分离株包膜糖蛋白H(gH)的基因多态性，分析该基因不同型别与婴儿HCMV肝炎的关系，为进一步了解HCMV致病机理及亚单位疫苗研究提供参考。
　　方法:
　　1、收集浙江户籍HCMV肝炎患儿的新鲜尿标本。所有患儿尿定量HCMV-DNA检测阳性，血清HCMV-IgM和抗凝外周血PP65抗原检测中一项或两项阳性，均有不同程度的肝功能损害;
　　2、建立Taqman探针荧光定量PCR检测gH基因型的方法。在HCMV gH基因保守区设计引物，可变区设计分别针对gH1和gH2型的荧光探针，采用荧光定量PCR技术建立HCMV gH基因型的检测方法;
　　3、用Taqman探针荧光定量PCR技术检测HCMV临床分离株gH基因型，凝胶电泳分析gH基因扩增产物片段，DNA测序分析不同gH基因型的多态性情况;
　　4、统计学分析。利用SPSS17.0统计学软件，对相关资料进行t检验和x2检验的统计学分析，P＜0.05认为具有统计学意义。
　　结果:
　　1、101例标本均被成功分型，其中68例为gH1型HCMV感染，29例为gH2型HCMV感染，4例为两者同时感染。101例临床标本以gH1为主，差异有统计学意义(x2=67.045，P＜0.01）;
　　2、HCMV gH基因分型在各年龄组中分布无差异性，均以gH1型为优势型;
　　3、黄疸肝炎组以3个月以下患儿为主，非黄疸肝炎组年龄分布无差异。黄疸型及非黄疸型肝炎组中HCMV gH基因型构成无差异性;
　　4、gH1型HCMV肝炎ALT、AST数值显著高于gH2型;而gH2型HCMV肝炎TB、DB数值显著高于gH1型HCMV肝炎，差异有统计学意义。
　　结论:
　　1、本研究建立了快速、灵敏、特异地对HCMV临床分离株进行gH基因分型的荧光定量PCR技术;
　　2、本研究中浙江地区婴儿HCMV肝炎病例HCMV临床分离株gH基因型别以gH1为主，gH基因序列相对保守，但仍存在一定的多态性;
　　3、HCMV gH基因型与婴儿HCMV肝炎临床特征有一定相关性。

目录

声明

致谢

摘要

缩略词表

主要仪器设备

引言

1 试验材料

1．1 HCMV病毒株

1．2 主要试剂

2 试验方法

2．1 患儿尿液样本的收集

2．2 建立Taqman探针荧光定量PcR检测gH基因型的方法

2．3 用Taqman探针荧光定量PCR技术检测HcMV临床分离株gH基因型，凝胶电泳分析gH基因扩增产物片段并测序验证

2．4 统计学分析

3 实验结果

3．1 一般资料

3．2 成功建立Taqman探针荧光定量PCR检测gH基因型的方法

3．3 临床标本HCMV分型结果

3．4 HCMV gH基因分型与婴儿HCMV肝炎的关系

4 讨论

5 结论

参考文献

婴儿人巨细胞病毒肝炎研究进展

作者简历及在学期间所取得的科研成果