FOXD3，一个新发现的甲基化调控的结直肠癌抑癌基因

摘要

结直肠癌是常见的消化道肿瘤之一，居恶性肿瘤第三位。近年来，肿瘤抑癌基因的表观遗传调控失调被认为是肿瘤发生与发展的重要机制，结直肠癌的表观遗传学研究也得到了广泛的开展。
　　目的:FOXD3，是FOX转录因子家族的重要成员之一，关于FOXD3在结直肠癌发生发展中的表达和功能尚不清楚，因此，我们希望通过相关实验进一步验证该基因在结直肠癌的功能并阐明其在 结直肠癌发生发展中作用的可能机制。
　　方法:通过MSP(methylation-specific PCR)和BGS(bisulfite genome sequencing)检测FOXD3的甲基化状态;通过RT-PCR和免疫组化检测正常组织和肿瘤组织中FOXD3的表达水平;通过体外转染，获得稳定表达FOXD3的结直肠癌细胞株，观察体外FOXD3对细胞表型的影响，包括细胞的增殖能力和迁移能力等;通过建立裸鼠皮下种植模型进一步观察体内FOXD3对肿瘤细胞生长的影响;通过WesternBlot检测相关通路蛋白的表达，研究FOXD3在结直肠癌中可能的调控机制。
　　结果: FOXD3在结直肠癌细胞株或组织中表达沉默或降低，并被检测到高度甲基化，细胞株去甲基化后FOXD3的表达得到修复;而在正常成人肠粘膜组织中却未发现FOXD3的甲基化。免疫组化研究发现，FOXD3蛋白在所有正常成人肠粘膜组织呈高表达而在大部分肠癌组织中层低表达或表达沉默，FOXD3蛋白的低表达与结直肠癌患者较差的组织学分类、更高的Dukes分期以及较多的淋巴结转移显著相关。此外，FOXD3低表达水平与结直肠癌患者的较短的生存期显著相关。细胞株转染FOXD3后，通过体内外实验发现FOXD3能抑制肿瘤细胞的生长、迁移，并且通过介导内源性内质网的细胞凋亡等通路途径促进肿瘤细胞的凋亡。
　　结论:FOXD3甲基化在结直肠肿瘤中是一个经常发生的、肿瘤特异的分子事件，FOXD3通过甲基化在结直肠肿瘤组织中表达沉默或降低，过表达FOXD3具有明显的抑制细胞增殖和迁移能力，并通过介导内源性内质网的细胞凋亡等通路促进肿瘤细胞的凋亡。这提示FOXD3做为一个新的结直肠癌抑癌基因，有望成为用于肿瘤的预后和风险评估的潜在的肿瘤标记物。

目录

声明

致谢

摘要

缩略语及中英文对照

前言

参考文献

第一部分 FOXD3在结直肠癌的表达以及与结直肠癌患者临床病理特征的相关性研究

引言

1．1 材料与方法

1．2 结果

1．3 讨论

参考文献

第二部分 FOXD3表达对结直肠癌细胞功能的影响

引言

2．1 材料与方法

2．2 结果

2．3 讨论

参考文献

第三部分 FOXD3促发凋亡的相关分子机制研究

引言

3．1 材料与方法

3．2 结果

3．3 讨论

参考文献

结论

综述

作者简历