射频加热增强热启动子诱导下的自杀基因治疗乳腺癌：面向介入分子影像引导下的基因治疗

摘要

目的:
　　通过研究射频加热技术增强热启动子诱导下的单纯疱疹病毒胸苷激酶/更昔洛韦（herpes simplex virus thymidine kinase/Ganciclovir，HSV-TK/GCV）基因治疗系统对多柔比星耐药性乳腺癌细胞的疗效，为创建介入分子影像引导下的射频加热联合基因治疗新方法奠定基础。
　　方法:
　　体外实验:腔室内四孔板接种人多柔比星耐药性乳腺癌MCF7/A细胞，通过慢病毒将热启动子引导下的HSV-TK基因导入MCF7/A细胞。利用荧光镜检及qPCR技术对基因表达进行检测。将腔室内四孔板置于37℃水浴中，射频加热后加更昔洛韦(10ug/ml)处理细胞。通过检测细胞增殖和凋亡来评估热启动子引导下的基因治疗联合射频加热对耐药性乳腺癌细胞的杀伤效果。
　　体内实验:建立裸鼠乳腺癌模型，并将荷瘤裸鼠分成4组:包括对照组(Control组);射频加热组（RFH组）;基因治疗组（PHSP-TK组）;及射频加热结合基因治疗组（PHSP-TK+RFH组），通过MRI对肿瘤大小变化进行检测。最后通过病理学技术对照证实MRI的表现。
　　结果:
　　荧光镜检及qPCR结果证实通过慢病毒导入的热启动子诱导的TK基因在射频加热条件下在乳腺癌细胞中有大量表达。PHSP-TK+ RFH组贴壁细胞数明显减少，死亡细胞明显增多，与PHSP-TK组及RFH组相比差异显著(p＜0.01)。流式检测进一步证实PHSP-TK+ RFH组肿瘤细胞的凋亡明显增加(p＜0.05）。在体内实验中，裸鼠荷瘤模型的PHSP-TK+ RFH治疗组相比于RFH组及PHSP-TK单处理组其肿瘤体积在处理后有显著缩小。
　　结论:
　　本研究证实通过热启动子诱导下HSV-TK基因在多柔比星耐药性乳腺癌细胞上的有效导入，联合射频加热增强了该基因疗法的疗效，这为创建介入分子影像引导下的耐药性肿瘤局部基因治疗技术奠定了基础。

目录

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致谢

摘要

缩略语表

1 引言

2 实验方法

2．1．1 实验材料与仪器

2．1．2 实验试剂与耗材

2．1．3 病毒、细胞和动物

2．2 体外实验

2．3 动物实验

2．4 数据处理

3 结果

3．1 MCF7／Adr细胞中表达HSV-TK基因

3．2 体外实验表明射频加热联合PHSP-TK基因基因治疗显著抑制MCF7／Adr细胞增殖，促进其凋亡

3．3 体内实验进一步表明射频加热联合PHSP-TK基因基因治疗抑制肿瘤增长，促进肿瘤凋亡

4 讨论

5 结论

参考文献

综述 HSV-TK自杀基因系统的肿瘤治疗

作者简介