从微生态与代谢组的角度探索Oddi括约肌松弛的胆管结石患者的胆道微环境

摘要

目的:
　　胆管结石是我国一种常见且危害严重的疾病，以其高残石率、高复发率、高再手术率的特点一直困扰着外科医生。胆道微环境在胆管结石的发生中起着至关重要的作用。既往研究发现，Oddi括约肌松弛与胆管结石的发生与复发密切相关，并推测这很可能和Oddi括约肌松弛后，肠道内容物反流改变胆道微环境有关。但是，目前尚无研究系统全面地调查胆管结石患者的胆道微环境。
　　方法:
　　本研究连续选取了2014年2月至2015年1月因胆管结石疾病于浙江大学医学院附属第二医院肝胆胰外科接受手术治疗的患者，前瞻性地收集了患者的人口统计学资料、病史资料、术前辅助检查信息及抗生素使用情况，并于术中采集其胆汁进行高通量实验:采用16S核糖体RNA基因测序技术描绘胆道微生态的结构，液相色谱-质谱联用技术剖析胆汁的组成。在此基础上，研究比较了Oddi括约肌松弛与非松弛患者在临床特征、胆道微生态结构与胆汁组成上的差异。
　　结果:
　　最终18名Oddi括约肌松弛的胆管结石患者与27名无Oddi括约肌松弛的胆管结石患者纳入分析。从临床的角度来看，Oddi括约肌松弛患者的白细胞计数（10.6vs.6.5;单位:109/L;P=0.005）、中性粒细胞百分比(75.6％vs.65.8％;P=0.050)及C反应蛋白（91.5vs.32.4;单位:mg/L;P=0.022）等炎症指标显著高于无Oddi括约肌松弛的患者。从微生态的角度来看，胆管结石患者胆道细菌以需氧菌与兼性厌氧菌为主，主要为变形菌门（平均丰度80.76％）与厚壁菌门（平均丰度10.47％），其中肠杆菌科尤为丰富（平均丰度58.01％）。相较于无Oddi括约肌松弛的患者，Oddi括约肌松弛的患者胆道细菌种类更为复杂多样。在Oddi括约肌松弛的患者胆道微生态中，诸如嗜胆菌属(2.09％vs.0.04％;P=0.011)和希瓦氏菌属(2.77％vs.0.67％;P=0.002)等强致病菌的丰度显著偏高，而诸如双歧杆菌科(0.002％vs.0.048％;P=0.034)与李斯特菌科(0.001％vs.0.016％;P=0.025)等益生菌或致病力弱的细菌丰度显著偏低。从代谢组的角度来看，Oddi括约肌松弛与非松弛患者胆汁成分的差异主要集中于脂质与胆汁酸:溶血磷脂酰乙醇胺、单不饱和脂肪酸和甘氨酸结合型胆汁酸浓度在L组显著偏高，而磷脂酸与牛磺酸结合型胆汁酸浓度在L组显著偏低。特别地，在Oddi括约肌松弛的患者胆汁中，参与牛磺酸代谢的嗜胆菌属丰度偏高，而牛磺酸及其衍生物浓度偏低。
　　结论:
　　Oddi括约肌松弛的胆管结石患者胆道细菌感染更为严重，胆汁成石性更强。这些发现提示，在胆管结石的治疗中必须高度重视Oddi括约肌的保护与胆肠返流的控制。

目录

声明

致谢

摘要

插图和附表清单

缩略词表

1 引言

2 材料与方法

2．1 研究人群

2．2 标本采集与保存

2．3 脱氧核糖核酸提取与16S rRNA测序

2．4 胆汁代谢组学分析

2．5 生物信息学分析

2．6 统计分析

3 研究结果

3．1 研究对象的临床特征

3．2 胆管结石患者的胆道微生态

3．3 Oddi括约肌松弛与非松弛患者胆道微生态的差异

3．4 Oddi括约肌松弛与非松弛患者胆汁成分的差异

3．5 嗜胆菌属与牛磺酸(衍生物)之间的联系

4 讨论

5 结论

6 展望

参考文献

肝胆管结石病诊治进展

作者简历及在学期间所取得的科研成果