CAMK2D和SMARCA2过表达与上皮性卵巢癌顺铂耐药的关系

摘要

卵巢癌是妇科肿瘤中死亡率最高的恶性肿瘤之一，严重威胁着妇女的生命与健康。上皮性卵巢癌是卵巢癌中最重要的病理类型，其在临床上常用的治疗方案是以铂类为主的化疗。然而患者在长期化疗过程中会逐渐产生获得性耐药，这也是卵巢癌患者死亡率高的主要原因之一，因此研究卵巢癌铂类药物的耐药机制就显得非常重要。本论文对卵巢癌顺铂敏感细胞株(A2780)和耐药细胞株(A2780-DR)进行转录组测序，结合生物信息学分析筛选出一些差异表达的mRNAs。通过qRT-PCR验证发现ABCB1，CAMK2D，SELE，ARHGAP29，SMARCA2，NKAIN3在卵巢癌敏感和耐药细胞株中均存在差异表达，其中CAMK2D和SMARCA2在A2780-DR耐药细胞株中mRNA表达水平最为显著。在不同的卵巢癌病人组织样本中我们发现继发生存RFS(Recurrence freesurvival)较低的样本CAMK2D和SMARCA2的表达水平较高，说明CAMK2D和SMAR CA2过表达与卵巢癌病人复发有关。我们分别在卵巢癌细胞株A2780和SKVO3中过表达了CAMK2D和SMARCA2并对其在顺铂药物处理下细胞生存率进行评估，发现细胞的药物敏感性均显著降低。为了研究这两个基因是如何参与卵巢癌顺铂耐药机制的，我们进行了细胞凋亡和细胞周期的变化分析，结果表明CAMK2D和SMARCA2可能是通过抑制细胞凋亡来降低卵巢癌细胞对顺铂的药物敏感性。此外，我们对不同处理的卵巢癌细胞株进行了定量蛋白质组学分析，发现CAMK2D和SMARCA2的过表达影响了细胞的基础代谢以及癌症相关通路的进程，从而进一步说明了CAMK2D和SMARCA2参与顺铂药物刺激的响应机制。

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致谢

摘要

主要缩略词

1 文献综述

1．1 卵巢癌概况

1．2 铂类抗癌药物的发展历史

1．3 卵巢癌铂类耐药的作用机制

1．3．1 顺铂作用靶点

1．3．2 细胞内药物浓度

1．3．3 细胞内分子的解毒作用

1．3．4 细胞内信号通路的影响

1．3．5 DNA损伤修复

1．3．6 细胞凋亡对铂类耐药的影响

1．3．7 调控蛋白对铂类耐药的影响

1．4 LncRNAs和microRNAs与铂类耐药的关系

1．5 临床上对铂类耐药患者的治疗

1．6 CAMK2D和SMARAC2与肿瘤的关系

2 基于转录组测序筛选卵巢癌顺铂耐药相关基因

2．1 引言

2．2 材料与方法

2．2．1 主要仪器和试剂耗材

2．2．2 细胞系和培养条件

2．2．3 细胞的解冻和复苏

2．2．4 细胞的消化、传代和冻存

2．2．5 转录组测序和生物信息学分析

2．2．6 卵巢癌顺铂敏感细胞株(A2780)和耐药细胞株(A2780-DR)的差异mRNAs表达水平检测

2．2．7 高级别浆液性卵巢癌患者组织样本实验

2．3 结果与分析

2．3．1 卵巢癌顺铂敏感细胞株(A2780)和耐药细胞株(A2780-DR)的差异mRNAs的表达谱分析

2．3．2 筛选出卵巢癌顺铂敏感细胞株(A2780)和耐药细胞株(A2780-DR)差异表达的候选基因

2．4 小结与讨论

3 CAMK2D和SMARCA2过表达降低了卵巢癌细胞对顺铂的药物敏感性

3．1 引言

3．2 材料与方法

3．2．1 主要仪器和试剂耗材

3．2．2 细胞系和培养条件

3．2．3 质粒的冻存和提取

3．2．4 细胞的转染实验

3．2．5 CAMK2D和SMARCA2的mRNA表达水平检测

3．2．6 CAMK2D和SMARCA2过表达的细胞株对顺铂的敏感性实验

3．2．7 流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期实验

3．2．8 Western blot实验

3．2．9 定量蛋白质组学分析

3．3 结果与分析

3．3．1 CAMK2D和SMARCA2过表达降低了卵巢癌细胞对顺铂的药物敏感性

3．3．2 CAMK2D和SMARCA2过表达降低了顺铂药物处理下卵巢癌细胞的凋亡

3．3．3 细胞周期和相关蛋白的western blot验证

3．3．4 不同处理下卵巢癌细胞株的定量蛋白质组学分析

3．4 小结与讨论

4 总结与展望

参考文献

硕士期间发表的论文