人血浆中替加环素浓度的测定及其群体药代动力学研究

摘要

目的:建立人血浆中替加环素(tigecycline，TGC)浓度测定的超高效液相-质谱串联(UPLC-MS/MS)方法，并进行方法的全验证。应用此测定方法对本院使用替加环素的院内感染的患者，包括医院获得性肺炎(Hospital-Acquired Pneumonia，HAP)、复杂性腹腔内感染（Complicated intra-abdominal Infections，CIAI）和复杂性皮肤及皮肤软组织感染(Complicated Skin and Soft Tissue Infections，CSSTI)患者的血样进行测定，利用相关浓度数据、给药及采血时间以及患者的病理生理指标，并通过Phoenix NLME程序，建立替加环素的基础药代动力学模型。然后选取合适的协变量，采用逐步回归法建立替加环素的群体药代动力学最终模型，为临床安全有效的药物治疗提供依据。
　　方法:①人血浆中替加环素浓度测定的UPLC-MS/MS方法建立。选择替加环素-d9作为内标，取50μL血浆样品经乙腈沉淀蛋白后，取上清浓缩挥干后用甲醇∶水(50∶50)复溶，取上清液10μL进样分析。采用Waters Acquity UPLC(@)BEH-C18column（2.1mm×50mm ID，1.7μm）色谱柱梯度洗脱分离，导入串联质谱(MS/MS)，采用选择反应检测（SRM）进行定量分析。检测的离子对分别为m/z568.2→513.1(TGC)和m/z595.1→514.0(TGC-d9)。②本院院内感染患者中替加环素群体药代动力学模型的建立。对于本研究收集得到的使用替加环素进行治疗的本院院内感染患者的血药浓度数据，应用Phoenix NLME程序，建立替加环素的基础药代动力学模型。由于所有患者均为稀疏采样，不能够支持复杂模型，最终选择一室模型为初始结构模型。然后选取性别、年龄、体重、给药前及给药后的总胆红素、白蛋白、谷丙转氨酶、碱性磷酸酶、谷草转氨酶、尿素氮、肌酐等协变量指标，采用逐步回归法建立该药物的群体药代动力学的最终模型，并用Bootstrap法对模型进行验证。
　　结果:①人血浆中替加环素浓度测定的UPLC-MS/MS方法建立。人血浆中替加环素在10-5000ng/mL范围内线性良好(R＞0.99)。替加环素的批内、批间精密度均≤9.27％，准确度范围为90.06％～107.13％。该分析方法选择性良好，灵敏度高，检测时间仅为4.5分钟，残留效应、基质效应及提取回收率均符合要求。血浆样品室温放置4小时稳定，-70℃放置130天稳定，3次冻融循环(-70℃)稳定。血浆样本预处理后上清液自动进样器中(4℃)放置24小时稳定。替加环素和内标储备液-20℃放置63天稳定。②本院院内感染患者中替加环素群体药代动力学模型的建立。应用Phoenix NLME程序，建立了替加环素的基础药代动力学模型。从协变量筛选过程中，发现年龄、肌酐和尿素氮都对血浆药物清除率(CL)均有显著影响，通过对三者不同组合逐步筛选，尿素氮对CL的影响最为显著，最终将其加入最终模型当中。建立的替加环素的最终群体药代动力学模型如下:CL=tvCL*PREBUNdc1dPREBUN*exp(ηCl)Equation1V=tvV*exp(ηV)Equation2tvV为替加环素体内药代动力学一室模型中表观分布容积V的群体典型值;tvCL为替加环素体内药代动力学一室模型中清除率CL的群体典型值。用Phoenix NLME软件对模型进行2000次的bootstrap验证，模型成功收敛，模型计算结果没有显著偏差。
　　结论:①建立的检测方法快速、灵敏，血浆样品用量少，全验证结果符合要求，适用于替加环素的临床检测。②利用收集并测定管的患者的血样浓度，用Phoenix NLME软件建立了本院院内感染患者中替加环素群体药代动力学模型，并获得了相关参数，为临床建立、优化给药方案，实现患者用药个体化提供依据。

目录

声明

论文说明

致谢

摘要

缩略词表

1 引言

2 材料与方法

2．1 研究对象

2．1．1 入选标准

2．1．2 排除标准

2．2 主要仪器

2．3 标准品和试剂

2．4 试验方法

2．4．1 UPLC-MS／MS技术测定人血浆中TGC的方法学验证

2．4．2 替加环素PPK模型的建立

3 实验结果

3．1．1 选择性

3．1．2 残留效应

3．1．4 最低定量限(LLOQ)

3．1．5 线性范围和标准曲线

3．1．6 准确度和精密度

3．1．7 稳定性

3．2 我院院内感染患者中TGC的PPK模型建立结果

3．2．1 患者基本信息

3．2．2 最终模型回归方程及参数值

3．2．3 基础模型和最终模型诊断图评价

3．2．4 模型验证

4 讨论

5 结论

参考文献

综述 替加环素的PK／PD研究进展

作者简介及在读期间取得的科研成果