MicroRNA-9/eIF5A2通路在非小细胞肺癌侵袭转移和顺铂耐药中的作用及机制研究

摘要

目的：
　　本研究的目的是验证eIF5A2基因在非小细胞肺癌侵袭转移和顺铂耐药中的作用及其机制，并进一步探讨MicroRNA-9/eIF5A2通路在调控非小细胞肺癌的侵袭转移和顺铂耐药中的作用及其机制
　　方法：
　　1.选择4种非小细胞肺癌细胞株(A549、HCC827、NCI-H358、NCI-H1299)，利用Western-blot和RT-PCR技术检测eIF5A2的表达，选取eIF5A2高表达的NCI-H1299细胞和eIF5A2低表达的A549细胞，采用RNAi干扰技术抑制肺癌细胞系中eIF5A2表达，观察其迁移侵袭能力的变化。
　　2.采用TGF-β1诱导A549细胞发生EMT，采用RNAi干扰技术抑制肺癌细胞系中eIF5A2表达，检测肺癌细胞中EMT相关蛋白表达水平、迁移侵袭能力的变化。
　　3.采用GC7（eIF5A2抑制剂）抑制A549、NCI-H1299肺癌细胞eIF5A2的表达，细胞活力检测试剂盒(CCK-8)检测肺癌细胞对顺铂化疗敏感性的变化，采用RNAi干扰技术抑制肺癌细胞系中eIF5A2表达，Western-blot和免疫荧光技术检测EMT标志物表达的变化。
　　4.检测A549、NCI-H1299肺癌细胞miR-9的表达，采用miR-9mimic和miR-9inhibitor分别上调/下调肺癌细胞中miR-9的表达，划痕实验和Transwell侵袭实验检测肺癌细胞迁移侵袭能力的变化，RT-PCR检测eIF5A2表达水平的变化，Western Blot检测EMT标志物表达水平的变化。
　　5.采用miR-9mimic和miR-9inhibitor分别上调/下调A549、NCI-H1299、NCI-H358肺癌细胞中miR-9的表达，CCK-8检测试剂盒、EDU法、流式细胞技术分别检测肺癌细胞经顺铂化疗后细胞活力、增殖能力和凋亡水平的变化。
　　结果：
　　1.A549肺癌细胞eIF5A2低表达、NCI-H1299肺癌细胞eIF5A2高表达，eIF5A2siRNA质粒转染能显著下调eIF5A2的表达，而eIF5A2的表达水平和肺癌细胞的迁移侵袭能力呈正相关。
　　2.通过下调A549肺癌细胞eIF5A2表达，能抑制TGF-β1诱导的A549细胞的EMT过程，从而降低肺癌细胞的迁移侵袭能力。
　　3.A549、NCI-H1299肺癌细胞eIF5A2的表达水平与顺铂的化疗敏感性呈负相关，而eIF5A2通过调控EMT过程从而调控肺癌细胞对顺铂的耐药性。
　　4.A549、NCI-H1299肺癌细胞中miR-9的高表达能下调eIF5A2的表达，并通过逆转EMT过程降低肺癌细胞的迁移侵袭能力。
　　5.A549、NCI-H1299、NCI-H358肺癌细胞中miR-9的表达与顺铂的化疗敏感性呈正相关，miR-9的高表达通过下调eIF5A2的表达，并逆转EMT过程提高肺癌细胞对顺铂化疗的敏感性。
　　结论：
　　本研究结果表明，在非小细胞肺癌细胞系中eIF5A2表达水平与侵袭转移能力呈正相关，而上调eIF5A2的表达能诱导肺癌细胞对顺铂的耐药，其机制可能与EMT过程密切相关。进一步研究发现，MicroRNA-9/eIF5A2通路能调控非小细胞肺癌细胞的迁移侵袭能力和对顺铂的耐药，其机制可能与EMT过程密切相关。

目录

声明

致谢

摘要

缩略语表

前言

第一部分 eIF5A2基因在非小细胞侵袭转移和化疗耐药中的作用及机制研究

1 研究背景

2 材料和方法

2．1 材料

2．2 实验方法

3 结果

3．1 eIF5A2与非小细胞肺癌细胞株侵袭转移的相关性研究

3．2 eIF5A2与非小细胞肺癌细胞株化疗耐药的相关性研究

4 讨论

第二部分 MicroRNA-9／eIF5A2通路在非小细胞肺癌侵袭转移和化疗耐药中的作用及机制研究

1 研究背景

2 材料和方法

2．2 实验方法

3 结果

3．1 MiR-9调控非小细胞肺癌细胞的迁移和侵袭

3．2 MiR-9调控非小细胞肺癌对顺铂的化疗耐药

4 讨论

5 结论

6 展望

参考文献

综述 eIF5A2在恶性肿瘤中的研究进展

作者简历及在学期间所取得的科研成果