曼氏无针乌贼精子发生及精子活力测定和保存

摘要

曼氏无针乌贼（Sepiella maindroni de Rochebrune 1884）是我国重要的经济海洋头足类，近年来在我国东海养殖开发。为了探究曼氏无针乌贼的精子特性，本研究采用亚显微技术研究了曼氏无针乌贼的精子发生及精子结构、环境因子对精子活力的影响，并在此基础进行了曼氏无针乌贼精子的超低温保存等。主要结果如下：
　　 1.精子发生其精子结构应用透射电镜技术研究曼氏无针乌贼精子发生过程中各阶段细胞的形态、细胞器及细胞核的动态结构变化。精原细胞呈椭圆形，细胞质少、核大，线粒体和高尔基体集中，于细胞一端形成“线粒体—高尔基体区”；初级精母细胞呈圆形或卵圆形，线粒体少，高尔基体少；次级精母细胞呈圆形或椭圆形，线粒体少，并有部分解体成囊泡。根据细胞核形态与各种细胞器的变化，精细胞分化过程分为6个时期。成熟精子为鞭毛型，分为头部、中段和尾部，表面附有一层裙状的质膜。头部由帽状顶体、顶体下腔和棒状细胞核构成。顶体电子密度较低；顶体下腔内充满颗粒状物质，分布均匀；核物质电子密度高，核内含空泡。中段主要由一对中心粒和不对称排列的多个球状或椭球状线粒体构成。尾部为细长鞭状，由轴丝及包绕轴丝的质膜组成，轴丝为典型的“9+2”微管结构。
　　 2.精子活力的测定通过对曼氏无针乌贼精子的激活率、活动时间和寿命的观测，研究了多种环境因子对其精子活力的影响。精子激活及运动的适宜温度范围为25~30℃、适宜盐度范围为10.6～30.6、适宜pH范围为8.0~8.6；不同浓度的葡萄糖、NaCl、KCl、MgCl2、CaCl2溶液对精子活力的影响不同，它们的最佳激活浓度分别为800、400、400、500、150mmol·L-1；不同浓度的EDTA-2Na溶液均不能激活精子；无Ca2+ 、Mg2+和HCO3-的人工海水对精子的激活率不高，精子活动时间和寿命都有不同程度的减少。
　　 3.精子的保存以精子的存活率、活力状态、活动时间和死亡时间为指标，进行稀释液、单种抗冻剂及其浓度、解冻温度、添加剂筛选，找到了最佳配方：以0.010g/mL蔗糖、12％ DMSO的D-2稀释液作为抗冻保护液，同8根鲜活精荚一起放入0.5ml的冷冻管，用镊子将精荚碾碎，三步法降温，保存180d后，精子存活率可达63.3％，活动时间和死亡时间分别为14.98min和20.63min，冻精效果良好。