水产品中病原微生物的监测及检测方法研究

摘要

水产品是一种兼顾了健康和口感的优质食品。但是近期水产品食用安全事件频发，病原微生物引起的安全事故占了很大的比例。因此建立和选择快捷有效的检测方法，了解水产品中致病性弧菌的菌群分布情况，监测本地区水产制品的带菌情况，为预防致病菌引起疾病的发生、提高本地区水产制品卫生质量都有积极的意义。具体的研究方法和结果如下：
　　1.通过调整增菌培养基成分比例、增菌温度、增菌时间和选择选择性平板，得出不同实验条件下的弧菌检出结果，综合检测效果最优化及成本考量，建立了常见弧菌同时检测的新方法，即鱼蛋白胨水36℃增菌18h，划线 TCBS和mCPC平板，36℃培养18～24h，挑取可疑菌落进行弧菌生化鉴定。并与 GB4789.7和SN/T1022两种方法比较，得出改良方法更能满足副溶血性弧菌、创伤弧菌和溶藻弧菌三种弧菌同时检测的要求。
　　2.通过不同比例大肠杆菌和志贺氏菌（1：1、2：1、1：2）混合竞争生长实验、等比例多菌种混合培养实验比较志贺氏菌检测方法，最后确立GB4789.5-2012，即志贺氏菌增菌肉汤41.5℃厌氧增菌2～24h，划线 XLD和MAC平板，36℃培养20～48h挑取可疑菌落进行生化鉴定，有更好的检测效果。
　　3.应用“同时检测常见致病菌改良方法”，分别对活鲈鱼和黑鲷体表黏液和肌肉组织、内脏组织和腮进行检测，共分离菌株31株，结合 API生化鉴定，最终得出活鱼中弧菌菌群组成包括副溶血性弧菌、溶藻弧菌、河流弧菌和最小弧菌，其中副溶血性弧菌和河流弧菌为主要菌。以活鱼个体来说，内脏组织检出率高于黏液组织和肌肉组织和腮。
　　4.监测本地区出口水产品病原菌污染状况。共检测741份水产品，合计2360检测项目，水产品病原菌阳性检出率1.35％，说明本地区出口水产品的卫生状况非常良好。其中副溶血性弧菌和创伤弧菌占所有检出致病菌的70％，可以知道在水产品中致病性弧菌属污染还是首要的病原菌污染。同时大样本量应用前文改良方法和优选方法，与2013年度传统检测方法监测状况进行比较，确定改良方法提高了水产品中致病弧菌的检测效率。

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引言

第一章 水产品中常见致病性弧菌检测方法建立

1材料与方法

1.1菌株

1.2主要培养基和试剂

1.3主要仪器

1.4实验样品准备

1.5常见致病性弧菌检测方法建立

1.6改良弧菌检测方法与现行弧菌检测方法比较

2结果与分析

2.1弧菌菌株的生理生化结果

2.2 实验条件的选择

2.3建立常见弧菌同时检测的改良方法

2.4 方法比较

3讨论

第二章 志贺氏菌检测方法比较

1材料与方法

1.1菌株

1.2主要培养基和试剂

1.3主要仪器和材料

1.4实验样品准备

1.5实验方法

2结果与分析

2.1三种选择性培养基菌落特征对比

2.2生化鉴定

2.3大肠杆菌和志贺氏菌竞争实验结果

2.4多菌种混合培养实验结果

2.5选择志贺氏菌检测方法

2.6人工污染样品验证实验

3讨论

第三章 活鲈鱼和活黑鲷中弧菌菌群分布分析

1材料与方法

1.1样品采集

1.2主要培养基和试剂

1.3主要仪器

1.4实验样品准备

1.5实验步骤

2结果与分析

2.1分离菌株的部位分布

2.2分离菌株的弧菌检出结果

3讨论

第四章 奉化地区出口水产品病原菌污染状况监测分析

1材料与方法

1.1样品来源

1.2主要培养基和试剂

1.3主要仪器

1.4主要检测方法

2结果与分析

2.1水产制品阳性检出率

2.2各病原菌阳性检出率

2.3病原菌在水产制品中分布情况

3讨论

3.1奉化地区出口水产制品整体情况分析

3.2改良方法和优选方法的使用效果

3.3其它检测技术的应用

结论

参考文献

附录A 活黑鲷和活鲈鱼分离菌株生化试验结果

致谢