下咽壁成纤维细胞的体外构建

摘要

目的：在组织工程领域,聚乳酸和聚乙二醇等具有较高生物相容性的聚合材料已广泛应用于体外生物构建。对下咽部组织来讲,成纤维细胞是其功能的重要组成部分。但组织工程在下咽壁成纤维组织体外构建中的研究还处于起步和发展阶段。此研究中我们通过合成一种新的聚氨酯材料，检测成纤维细胞在聚氨酯上的粘附、增殖和分化情况，希望为此聚氨酯作为成纤维组织工程支架材料的可行性提供依据。
　　方法：首先用乙酰丙酮铁催化聚乙二醇(PEG)(分子量2000)与L-丙交酯(L-LA)以不同比例进行开环聚合合成低分子量聚丙交酯-聚乙二醇-聚丙交酯(PLA-PEG-PLA)三嵌段共聚物,通过凝胶渗透色谱（GPC）和核磁共振(1H NMR)测试分析所得嵌段共聚物的分子量及其结构特征。第二步用六亚甲基二异氰酸酯（HDI）进行扩链合成聚氨酯（cPU）,通过傅立叶红外光谱分析（FTIR）表征聚氨酯的化学结构,测差动量热扫描分析（DSC）、动态接触角、吸水性、拉力、失重率分别评价共聚物的玻璃化转变温度、亲水性、力学性能及其降解速率。
　　结果：该聚氨酯具有低玻璃化转变温度和良好的润湿性良好的柔韧性。这些特性使得 cPU是一个很好的咽部软组织的候选材料。随后将体外培养的成纤维细胞接种于此平面聚氨酯,采用 MTT、细胞形态观察法（HE染色观察法、免疫荧光观察法）和Western blot观察并检测细胞在支架上的粘附和生长情况，并检测 cPU在体内的相容性。结果显示 cPU可以支持下咽成纤维细胞的生长和血管生成。
　　结论：我们的研究结果表明，cPU与成纤维细胞复合培养为下咽壁的重建带来新的希望。

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引言

1研究内容和技术路线

1.1 研究内容

1.2 技术路线

2 材料和方法

2.1实验试剂与耗材

2.2实验仪器

2.3 PLA-PEG-PLA三嵌段共聚物的合成

2.4 可降解聚氨酯材料的制备

2.5 PLA-PEG-PLA三嵌段共聚物的结构表征

2.6聚氨酯材料的性能检测

2.7细胞培养

2.8成纤维细胞生长速率测定

2.9 HE染色分析

2.10免疫荧光检测

2.11 Western blotting

2.12 聚氨酯(cPU)体内相容性

2.13统计分析

3实验结果

3.1 PLA-PEG-PLA三嵌段共聚物的结构表征

3.2 聚氨酯材料的性能检测

3.3 成纤维细胞生长速率观察

3.4 HE 染色观察

3.5免疫荧光观察

3.6 Western blotting观察细胞在支架上的蛋白含量

3.7支架植入大鼠皮下的组织相容性观察

4讨论

5.结论

参考文献

附录A 主要试剂配制

附录B 中英文词对照

附录C 综述:喉软骨支架结构与构建

在学研究成果

致谢