桑白皮提取物对2型糖尿病大鼠肝脏的保护作用及机制研究

摘要

目的：
　　2型糖尿病普遍存在脂肪肝等病变。AMPK被公认为肝脏脂类生物合成途径的主要调节者。为了研究桑白皮提取物（MCE）在干预2型糖尿病大鼠的过程中对血糖、血脂、肝脏的损伤，并观察脂肪空泡在肝脏的沉积情况，我们将对脂质代谢通路AMPK及其下游脂肪酸合成相关靶基因 SREBP-1、ChREBP、ACC、FAS开展研究并探讨其对肝损伤及NAFLD的治疗作用及其分子机制。
　　方法：
　　将SD大鼠分为N组（正常组）、N+M组（正常加桑白皮提取物组）、D组（糖尿病组）、M+D+M组（糖尿病前期预防组）、D+M组（糖尿病单纯治疗组）。在第8-12周（即预防阶段）对M+D+M组大鼠进行MCE预防，第12-20周（即糖尿病治疗阶段）对M+D+M组、D+M组进行MCE治疗，提取物的灌胃剂量为10g/kg·d。相应对照组以灌胃方式给予等体积生理盐水。通过测定正常生理指标，如血脂（TC、TG、FFA），肝脏功能指标（AST、ALT），空腹胰岛素水平（FINS）；各项实验测量指标，如 H&E染色、苏丹III染色、油红O染色；以及检测AMPK及其下游通路ACC的表达水平等来探讨桑白皮提取物对2型糖尿病大鼠肝脏的保护作用及机制。
　　结果：
　　1.桑白皮提取物可显著降低2型糖尿病大鼠血清血脂水平—TC、TG、FFA
　　2.桑白皮提取物改善2型糖尿病大鼠肝功能
　　3.桑白皮提取物改善2型糖尿病大鼠糖耐量
　　4.桑白皮提取物可降低空腹血糖及HOMA-IR
　　5.桑白皮提取物可逆转2型糖尿病大鼠肝结构损伤
　　观察非糖尿病大鼠的肝脏切片图发现肝小叶组织结构完整，中央静脉结构清晰，肝细胞形态正常、边界清晰且呈多边形规律排布，细胞质呈粉色嗜酸性而无任何内含物。而糖尿病组部分肝小叶中央静脉缺如或狭窄，肝细胞大小形状不规则，含有大量脂滴空泡；糖尿病前期预防组大鼠肝小叶中央静脉及肝索结构较清晰，肝细胞脂肪变性明显改善，效果优于糖尿病单纯治疗组。
　　6.桑白皮提取物可改善糖尿病组大鼠肝脏脂肪变性
　　从油红染色结果发现糖尿病大鼠肝脏细胞中有大量脂肪滴蓄积；M+D+M组脂滴数量大量减少，脂滴体积明显减小；D+M组脂滴含量介于M+D+M组与D组之间，提示桑白皮提取物预防治疗能更好的改善糖尿病对照组大鼠的脂质沉积。
　　7.桑白皮提取物对大鼠肝脏脂代谢相关因子mRNA水平的影响
　　糖尿病大鼠肝组织 AMPK mRNA表达受阻；糖尿病前期预防组和糖尿病单纯治疗组AMPK mRNA的表达量上升；糖尿病前期预防组AMPK mRNA表达量较糖尿病单纯治疗组显著上升。
　　与糖尿病组大鼠相比，桑白皮提取物降低预防治疗组大鼠肝脏中 SREBP-1c、ChREBP、ACC、FAS mRNA的表达量；糖尿病前期预防组的SREBP-1c、ChREBP、ACC mRNA的表达量较糖尿病单纯治疗组显著降低。
　　8.桑白皮提取物对大鼠肝脏SREBP-1c、ChREBP、ACC、FAS蛋白表达量的影响
　　糖尿病组大鼠SREBP-1c、ChREBP、ACC蛋白表达量增高，糖尿病前期预防组与糖尿病单纯治疗组大鼠的肝脏中 SREBP-1c、ChREBP、ACC蛋白表达量降低；糖尿病前期预防组的SREBP-1c、ChREBP、ACC的表达量较糖尿病单纯治疗组显著降低。
　　结论：
　　总结以上研究结果，桑白皮提取物对2型糖尿病大鼠有降血糖、降血脂、改善肝功能的作用。同时，胰岛β细胞功能得到保护、肝脏的结构与脂肪空泡程度得到一定程度的恢复。糖尿病前期预防组比单纯治疗组取得更加的治疗结果。另外，桑白皮提取物可以恢复AMPK、SREBP-1、ChREBP、ACC的mRNA与蛋白的表达水平。推断桑白皮提取物通过上调 AMPK的表达，减少转录因子SREBP-1c、ChREBP的水平，从而抑制脂肪酸合成相关酶FAS和ACC的表达，成为调节肝脏脂肪合成的关键通路。说明桑白皮提取物通过抑制脂肪酸合成相关酶改善脂肪肝，且对糖尿病前期大鼠进行预防干预，治疗效果更佳。因此，桑白皮提取物的预防作用可作为下一步的研究重点。

目录

声明

引言

1材料与方法

1.1动物实验

1.2实验仪器与试剂

1.3实验方法

1.4统计学处理

2技术路线

3实验结果

3.1桑白皮提取物可降血脂TC、TG、FFA水平

3.2桑比皮提取物改善2型糖尿病大鼠肝功能

3.3桑白皮提取物能增加胰岛素敏感性

3.4桑白皮可降低空腹血糖及胰岛素抵抗指数

3.5桑白皮提取物能改善肝脏病理学变化

3.6桑白皮提取物能抑制肝脏脂肪变性

3.7桑白皮提取物对大鼠肝脏脂代谢相关因子mRNA水平的影响

3.8桑白皮提取物对大鼠肝脏SREBP-1c、ChREBP、ACC、FAS蛋白表达量的影响

4讨论

5结论

参考文献

附录A 中英文缩略词对照表

文献综述:桑树资源在预防和治疗2型糖尿病的作用

在学研究成果

致谢