螯虾细胞内吞相关因子功能鉴定及其应用研究

摘要

对虾白斑综合征病毒（White spot syndrome virus，WSSV）是对虾和螯虾养殖业最具毁灭性的病原之一，能够引起大规模病害暴发和高致死率，对水产养殖业造成了巨大的经济损失。已报道，含缬酪肽蛋白做为内吞和自噬的新标志物在细胞内发挥丰富的功能，包括泛素-蛋白酶体依赖的蛋白降解、膜融合、抗细胞凋亡、内质网相关降解、激活NF-κB和核酸修复等，并在poliovirus、hepatitis B virus、coronavirus、Sindbis病毒的感染过程发挥一定作用。
　　因此，本文利用分子生物学研究方法探究红螯螯虾含缬酪肽蛋白在 WSSV感染过程发挥的作用，并通过1H NMR法检测红螯螯虾感染 WSSV后组织代谢物变化，从代谢层面阐释含缬酪肽蛋白在 WSSV感染过程发挥的作用，以期为病毒防治提供一种思路。本研究取得了如下成果：
　　1.利用5'和3' RACE技术克隆获得红螯螯虾含缬酪肽蛋白（Cq-VCP）的cDNA，Cq-VCP开放阅读框（ORF）为2385 bp，共编码794个氨基酸，具有保守的CDC48和AAA结构域，Cq-VCP蛋白与其他物种的VCP蛋白具有较高的相似性。qPCR分析显示，Cq-VCP在性腺、肉、血细胞和造血组织中的表达量较高。红螯螯虾感染WSSV6h后，造血组织中Cq-VCP的转录表达显著上调，揭示Cq-VCP可能在红螯螯虾的免疫防御中发挥了重要作用。
　　2.利用 RNA干扰技术敲降 Cq-VCP基因表达，发现WSSV的转录及入胞均被抑制，病毒感染Hpt细胞6h后共聚焦观察发现VCP与VP28共定位，表明VCP在WSSV入胞和复制过程中具有重要作用。
　　3.红螯螯虾感染WSSV1h和6h后，鳃组织的能量代谢和蛋白代谢增强，感染WSSV6h后，肝胰腺组织的能量代谢和脂质代谢增强，表明病毒感染能够引起宿主能量代谢增强，这种变化有利于病毒成功地实施感染。而VCP具有水解ATP供能的作用，这也就从另一方面解释VCP在病毒感染过程发挥的作用。
　　综上，本论文初步探究了VCP在WSSV感染红螯螯虾Hpt细胞过程中发挥的作用，为开展防治WSSV有效干预靶点设计与研究提供理论依据和新思路，对WSSV的防治具有重要意义。

目录

声明

引言

第一章 绪论

1. 对虾白斑综合征病毒概述

2. 含缬酪肽蛋白（valosin-containing protein, VCP）在细胞中的生物学功能

3. 系统生物学方法研究WSSV感染后宿主应答

4 本研究的目的和意义

第二章 红螯螯虾含缬酪肽蛋白基因扩增

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

4小结

第三章 红螯螯虾含缬酪肽蛋白功能初探

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

4小结

第四章 代谢研究法揭示VCP在WSSV感染过程的作用

1 材料与方法

2结果

3讨论

4. 小结

第五章 论文创新点及工作展望

1. 创新点

2. 展望

参考文献

在学研究成果

致谢