去甲二氢愈创木酸交联猪去细胞脊髓支架及其相关特性的研究

摘要

目的：观察去甲二氢愈创木酸（Nordihydroguaiaretic Acid，NDGA）交联猪去细胞脊髓支架的结构及性能。
　　方法：取成年猪胸段脊髓，采用2次冻融化学萃取法对脊髓行去细胞处理得到脊髓去细胞支架，再用2.5g/L NDGA溶液进行交联处理。在体视显微镜及扫描电镜下分别观察猪去细胞脊髓支架及NDGA交联及NDGA交联猪去细胞脊髓支架的结构。采用Instrong生物力学测试仪检测正常猪脊髓（正常组）、猪去细胞脊髓支架（未交联支架组）及NDGA交联猪去细胞脊髓支架（交联支架组）的抗拉强度和弹性模量。取第4代SD大鼠星形胶质细胞分别与未交联支架及NDGA交联支架联合培养，采用CCK8法检测细胞生长率，评价支架的细胞毒性。将未交联支架和DNGA交联支架分别包埋至SD大鼠背部皮下，在1、2、4w后取出检测其包埋后的降解率。并取包埋4w的组织行HE染色及CD8+免疫荧光染色，评价支架的生物相容性。
　　结果：正常组脊髓组织为圆柱状，呈乳白色，横切面可见灰质与白质分界明显；未交联支架基本保持原组织外形，呈白色半透明状，白质与灰质无明显分界；交联支架质地稍变硬，呈棕黄色。扫描电镜显示未交联支架与交联支架内的基质纤维保存完好，相互交织成三维网状结构，内部孔隙联通。未交联支架的抗拉强度及弹性模量较正常组显著下降（P<0.05）；交联支架抗拉强度和弹性模量较未交联支架显著增强，两组比较有统计学差异（P<0.05），但仍低于正常组（P<0.05）。星形胶质细胞在交联组及未交联组中均生长良好，共培养时间越久，OD值越大，两组相同时间点OD值比较无统计学差异（P﹥0.05）。相同时间点交联组相对于未交联组在体内降解率明显下降。包埋4周后未交联组HE染色可见大量炎症细胞及成纤维细胞浸润在支架内，并且有肉芽组织聚集在未交联支架的内部孔隙中；交联组炎症细胞明显减少，且可见新生血管装结构。相应的CD8+荧光染色见NDGA交联支架中T淋巴细胞较未交联支架显著减少。
　　结论： NDGA交联猪去细胞脊髓与未交联猪去细胞脊髓支架比较三维结构未见明显改变，但生物力学性能和体内抗降解能力显著增强，生物相容性提高，且无明显的细胞毒性，可作为脊髓损伤修复的支架材料。

目录

声明

引言

1猪去细胞脊髓支架的制备及相关特性研究

1.1主要实验材料

1.2实验方法

1.3实验结果

1.4讨论

2大鼠星形胶质细胞分离、培养及鉴定

2.1实验材料

2.2实验方法

2.3实验结果

2.4讨论及小结

3猪去细胞脊髓支架生物学特性研究

3.1主要实验设备

3.2实验方法

3.3实验结果

3.4结论

4去甲二氢愈创木酸交联猪去细胞脊髓支架及其相关特性研究

4.1实验器材

4.2实验方法

4.3实验结果

4.4结论与讨论

5英文缩略词表

参考文献