慢性炎症对终末期肾病大鼠血管钙化的影响及机制研究

摘要

目的：研究慢性炎症对终末期肾病大鼠血管钙化的影响及机制,为寻找防治终末期肾病血管钙化的有效措施提供实验性理论依据。
　　 方法：(1)慢性肾衰动物模型的制备:成年雄性SD大鼠30只,体重(200±20)g,随机分为对照组(Ctr,n=6)、慢性肾衰组(CRF,n=12)、慢性肾衰+炎症组(CIF+Ⅰ,n=12)。72h后,每天分别以生理盐水(10ml／Kg)、腺嘌呤(300mg／Kg)和腺嘌呤(300mg／Kg)灌胃6周,其中(CRF+Ⅰ)组隔日以10％casein皮下注射(1.2g／Kg),观察大鼠一般精神状态、饮食和死亡率等。(2)标本处理及指标检测:造模6周后,大鼠用3％戊巴比妥钠(30mg／Kg)腹腔麻醉后,腹主动脉取血备用,化学比色法检测血清生化指标(血钙、血磷、血肌酐和血尿素氮)和ELISA法检测血甲状旁腺激素；取胸主动脉,其中5mm用4％的中性甲醛固定作Von Kossa钙染色和免疫组化检测α-SMA蛋白表达,其余部分存于-70℃冰箱用于RT-PCR检测(IL-6、BMP-2、Cbfα-1、Wnt3a和ALP的mRNA表达)。
　　 结果：(1)血清生化指标:6周后CRF和(CRF+Ⅰ)组大鼠出现了明显肾功能衰竭表现,组间血肌酐值(μmol／L)和尿素氮值(mmol／L)比较,CRF(270.93±29、27.9±4.1)和(CRF+Ⅰ)组(270.63±24.54、33.65±8.26)均高于Ctr组(66.85±1.5、6.62±0.28),差异有统计学意义(P<0.05,下同),而CRF和(CRF+Ⅰ)两组间差异无统计学意义(P>0.05,下同)；CRF和(CRF+Ⅰ)组均有钙磷代谢紊乱,组间血钙值(mmol／L)比较,CRF组(2.23±0.09)最低,(CRF+Ⅰ)组(2.37±0.1)次之,Ctr组(2.57±0.14)最高,组间差异均具有统计学意义；组间血磷值(mmol／L)比较,CRF(5.23±0.27)和(CRF+Ⅰ)组(5.37±0.42)均高于Ctr组(2.1±0.2),差异有统计学意义,CRF和(CRF+Ⅰ)组间差异无统计学意义。(2)甲状旁腺激素(ng／L)的ELISA检测:CRF(42.70±3.29)和(CRF+Ⅰ)组(43.98±2.49)均高于Ctr组(29.60±2.85),差异有统计学意义,而CRF和(CRF+Ⅰ)组间差异无统计学意义。(3)形态学检测:①VonKossa染色:结果显示Ctr和CRF组胸主动脉并无明显可见的阳性钙化染色,而(CRF+Ⅰ)组胸主动脉有不同程度的明显的钙染色。②α-SMA蛋白表达情况:Ctr组α-SMA蛋白表达量(0.16±0.01)最高,CRF组(0.13+0.01)次之,(CRF+Ⅰ)组(0.08±0.04)最低,组间差异均具有统计学意义。(4)IL-6、BMP-2、Cbfα-1、Wnt3a和ALP mRNA相对表达量的RT-PCR检测结果:IL-6 mRNA的相对表达量,(CRF+Ⅰ)组(0.85±0.35)大于CRF(0.58±0.13)和Ctr组(0.51±0.18),组间差异有统计学意义,而CRF和Ctr组间差异无统计学意义；BMP-2、Wnt3a和Cbfα-1 mRNA的相对表达量,CRF(1.01±0.28、0.81±0.23、1.38±0.56)和(CRF+Ⅰ)组(1.30±0.43、0.94±0.40、1.47±0.55)均高于Ctr组(0.54±0.17、0.43±0.09、0.72±0.25),组间差异有统计学意义,而CRF和(CRF+Ⅰ)组间差异无统计学意义；ALP mRNA的相对表达量,(CRF+Ⅰ)组(0.62±0.22)高于Ctr(0.08±0.16)和CRF组(0.13±0.25),而Ctr和CRF组组间差异无统计学意义。
　　 结论：1.慢性肾功能衰竭继发的甲状旁腺功能亢进和矿物质代谢紊乱可以促进血管平滑肌向成骨／成软骨样细胞转分化,进而启动血管钙化。2.慢性炎症可加速终末期肾病血管钙化的进程。3.慢性炎症参与终末期肾病血管钙化形成的机制可能是通过上调IL-6、BMP-2、Wnt3a、Cbfα-1和ALP等一系列钙化促进因子的高表达来促成血管平滑肌细胞转分化和矿化过程进而导致钙化的发生。

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终末期肾病继发高磷血症所致血管钙化的研究进展(综述)

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