川芎嗪对大鼠重症急性胰腺炎肾脏损伤保护作用及机制研究

摘要

目的:观察大鼠重症急性胰腺炎(SAP)治疗前后大鼠血清超氧化物岐化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、血清尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、血清淀粉酶(AMY)水平的变化；观察胰腺、肾脏组织的细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达,以研究川芎嗪对大鼠SAP肾损伤保护机制。
　　 方法:雌性SD大鼠45只,体重200-250g,随机分为正常组(N组)、重症胰腺炎组(P组)、川芎嗪治疗组(C组)。每一组再随机分为12h、24h、48h三个时间段。术前大鼠行腹腔注射麻醉,麻醉满意后,予消毒铺巾,逐层开腹,暴露胰腺,以胰管走行为解剖定位标志找到胆管汇入十二指肠乳头处。正常组只进行开腹和牵拉肠壁两种侵袭性操作,重症胰腺炎组造模成功后将生理盐水(10ml／kg)从大鼠尾静脉注入,川芎嗪治疗组造模成功后将川芎嗪注射液(200mg／kg)从大鼠尾静脉注入。用SOD放射性125I标记放免试剂盒及MDA硫代巴比妥酸法(TBA法)试剂盒检测血清超氧化物岐化酶及丙二醛。用全自动生化分析仪测定BUN、Cr、AMY；用TUNEL法检测肾脏细胞凋亡指数；用免疫组化和免疫印迹法检测肾脏Bcl-2和Bax蛋白的表达,用SPASS16.0软件分析所有检测结果,行方差分析。
　　 结果:1.胰腺的病理改变:在大体形态上,正常组腹腔内未见渗液,胰腺外观未见充血水肿,胰周组织无粘连。重症胰腺炎组12h时大鼠可见少量血性腹水,胰腺色泽淡紫色,充血水肿,局部坏死出血,大网膜、肠系膜、胰腺周围少许脂肪皂化；24h时可见较多红色血性腹水。胰腺色泽暗褐色,与周围组织部分粘连,大网膜、肠系膜、胰腺周围可见较多脂肪皂化；48h时可见大量暗红色浑浊腹水,大量坏死、出血,大片脂肪皂化。川芎嗪治疗组大鼠腹腔内也有腹水生成,为血性渗液,但腹水量与重症胰腺炎组相比较明显减轻。胰腺也可见充血水肿,但范围与重症胰腺炎组相比明显缩小。光镜下观察:正常组胰腺叶及小叶间隔正常,细胞形态正常,周围间质无炎细胞浸润。重症胰腺炎组12h时可见胰腺叶及小叶间隔增宽,灶性坏死、出血,间质少量炎细胞浸润；24h时胰腺损伤较前加重,胰腺叶及小叶间隔疾进一步增宽,中量的间质细胞浸润,胰腺腺泡肿胀,部分坏死、出血。48h时胰腺损伤程度已经极为严重,表现为腺泡细胞严重肿胀,伴有大片坏死、出血,部分小叶结构完全无法辨认。川芎嗪治疗组在胰腺肿胀坏死程度、胰周间质细胞浸润程度等各项指标上与同时段重症胰腺炎组比较均有减轻。2.肾脏的病理变化:肉眼观察正常组大鼠肾脏无充血水肿,无出血点,肾周间隙未见渗液,肾周脂肪无皂化。重症胰腺炎组12h时肾脏外观轻度水肿,体积略增大；24h时肾脏充血水肿较前加重,并可见散在出血点；48h时肾脏充血水肿继续加重,色泽呈紫褐色,可见大量出血点,包膜紧张,部分肾周脂肪皂化。川芎嗪治疗组随时间延长逐渐出现肾脏充血水肿继而出血点形成,肾周间隙逐渐出现渗液。但与同时段重症胰腺炎组比较程度较轻。光镜下检查:正常组大鼠肾脏组织无论是肾小球还是肾小管均未见充血水肿,肾周组织未见炎细胞浸润。重症胰腺炎组12h时肾小球、肾小管均累及,表现为淤血、肿胀,以肾小管较为明显,肾周组织可见少许炎细胞浸润。重症胰腺炎组24h时肾脏较前肿胀,无法辨认部分肾小管结构,可见较多肾间质炎细胞。重症胰腺炎组48h时肾脏病变继续加重,出现了坏死上皮细胞、大量炎细胞,以及管型。川芎嗪治疗组各时段肾脏组织随时间延长出现了肾小管上皮细胞坏死,肾周组织炎细胞浸润,肾周脂肪皂化等表现,但与同时段重症胰腺炎组比较损伤程度均减轻。3.BUN、Cr、AMY、TNF-α的变化。重症胰腺炎组BUN、Cr、AMY、TNF-α随时间延长逐渐升高,在各时间点均较正常组升高(P<0.05)。川芎嗪治疗组BUN、Cr、AMY、TNF-α较重症胰腺炎组降低(P<0.05)。4.MDA、SOD的变化。重症胰腺炎组MDA随时间延长逐渐升高,在各时间点均较正常组升高(P<0.05)。重症胰腺炎组SOD随时间延长逐渐降低,在各时间点均较正常组降低(P<0.05)。川芎嗪治疗组MDA较重症胰腺炎组降低(P<0.05)。川芎嗪治疗组SOD较重症胰腺炎组升高(P<0.05)。5.肾脏组织病理学评分:重症胰腺炎组肾脏组织病理学评分随时间延长逐渐升高,在各时间点均较正常组升高(P<0.05)。川芎嗪治疗组肾脏组织病理学评分较重症胰腺炎组降低(P<0.05)。6.肾脏细胞Bcl-2／Bax的变化:重症胰腺炎组Bcl-2／Bax比值随时间延长逐渐降低,在各时间点均较正常组降低(P<0.05)。川芎嗪治疗组Bcl-2／Bax比值随时间延长逐渐升高,在各时间点均较重症胰腺炎组升高(P<0.05)。结果显示在各时间点川芎嗪均能升高Bcl-2／Bax比值。
　　 结论:川芎嗪能保护SAP肾损伤,其机制可能是通过清除氧自由基,调节细胞凋亡和炎症介质的释放等方面来实现的。

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重症急性胰腺炎肾脏损伤机制研究

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