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致谢
摘要
1 综述
1.1 颅骨的发育
1.2 参与颅骨发育的信号通路
1.3 参与颅骨发育的转录因子
1.4 Sufu与Hh通路的关系及相关研究
2 实验内容与设计
2.1 实验目的与意义
2.2 实验内容
2.3 实验流程图
3 实验材料与方法
3.1 实验动物饲养与基因型鉴定
3.1.1 实验小鼠的来源、构建
3.1.2 基因型鉴定
3.2 实验材料的处理
3.2.1 石蜡切片材料处理
3.2.2 总RNA的提取和cDNA的制备
3.2.3 探针的制备
3.2.4 Western blot样品的蛋白提取
3.3 实验方法
3.3.1 苏木精、伊红染色法(简称H·E染色)
3.3.2 骨骼染色
3.3.3 冰冻切片X-gal染色
3.3.4 石蜡切片原位杂交
3.3.5 von Kossa染色(矿化结节染色法)
3.3.6 Brdu和Tunel染色
3.3.7 免疫荧光
3.3.8 Western Blotting
4 实验结果及分析
4.1 基因型鉴定及表型分析
4.1.1 基因型鉴定
4.1.2 表型分析
4.2 Sufu基因在颅骨发育中的表达模式
4.3 条件性敲除Sufu后神经嵴细胞的迁移和分布情况
4.4 在神经嵴细胞中敲除Sufu基因不会影响细胞凋亡
4.5 在神经嵴细胞中敲除Sufu基因减少了额骨原基的细胞增殖
4.6 Sufu敲除造成额骨原基成骨分化Marker的表达受到明显抑制
4.7 Sufu敲除引起不同信号通路发生变化
4.8 Sufu敲除引起Runx2上游相关骨形成基因表达降低
4.9 Sufu敲除引起Gli存在状态发生变化
4.10 在神经嵴来源的细胞中敲除Sufu引起的额骨形成异常可以被同时敲除口抬所恢复
5 总结与讨论
5.1 实验总结
5.2 讨论
参考文献