电针耳穴对年龄相关性聋豚鼠听觉中枢老化的影响及机制研究

摘要

目的：探讨 NR2A、GAD、BDNF、GAP-43 在豚鼠年龄相关性听力损失发病中的作用和电针对年龄相关性聋豚鼠听觉中枢老化的影响及机制。方法：1、动物模型的建立和分组：豚鼠30只随机分为三组,每组10只。D-半乳糖模型组：豚鼠颈背部皮下注射D-半乳糖300㎎/㎏•d,每日1次,连续注射6周；D-半乳糖+电针组：D-半乳糖的用法用量同模型组,同时电针听宫、翳风两个穴位；对照组：给予等量生理盐水颈背部皮下注射,每天1次,连续6周。18月龄豚鼠10只(老年组)自然喂养。2、ABR检测：刺激声为110dB SPL时,各组行ABR检测,比较波Ⅲ潜伏期的变化情况。3、听皮层BDNF和 GAP-43： 运用 Western-blot 技术检测听皮层组织中 BDNF 和GAP-43的蛋白表达。4、蜗神经背核超微结构研究：透射电镜技术观察蜗神经背核神经元、突触超微结构变化情况。5、蜗神经背核(DCN) NR2A、GAD：采用实时荧光定量 PCR 技术检测蜗神经背核组织中NR2A、GAD mRNA表达变化情况。结果：1、ABR阈值： D-半乳糖模型组 ABR 波Ⅲ潜伏期比对照组延长(P<0.05)；D-半乳糖模型+电针组 ABR 波Ⅲ潜伏期比 D-半乳糖模型组缩短(P<0.05)。2、蜗神经背核NR2A mRNA表达：对照组、D-半乳糖模型组、D-半乳糖模型+电针组和18月龄组DCN局部NR2A mRNA扩增倍数分别为1、1.18±0.25、1.52±0.53和1.29±0.54(差异无统计学意义,F=1.456, P=0.264)。3、蜗神经背核GAD mRNA表达：对照组、D-半乳糖模型组、D-半乳糖模型+电针组和18月龄组DCN局部GAD mRNA扩增倍数分别为1、1.07±0.19、1.45±0.38和1.08±0.21(D-半乳糖模型+电针组与D-半乳糖模型组比较,GAD表达增加,P<0.05)。4、听皮层组织 BDNF、GAP-43 表达：D-半乳糖模型+电针组豚鼠听皮层组织BDNF、GAP-43表达明显高于D-半乳糖模型组(P<0.05)；与对照组相比,D-半乳糖模型组豚鼠听皮层BDNF、GAP-43表达降低(P<0.05)；D-半乳糖模型组GAP-43表达与老年组对比无明显差异(P>0.05)。5、蜗神经背核神经元突触后密度(PSD)厚度变化：对照组、D-半乳糖模型组、D-半乳糖模型+电针组和18月龄组的PSD厚度分别为58.89±9.82、33.77±10.79、44.99±15.27和31.95±4.32 (对照组与D-半乳糖模型组、18月龄组比较,P <0.001；D-半乳糖模+电针组与D-半乳糖模型组,P <0.05；D-半乳糖模型组与18月龄组比较,P>0.05)。6、蜗神经背核神经元超微结构：D-半乳糖模型组DCN神经元胞核形态不规则、线粒体可见明显水肿且空泡样变、嵴形态不清晰、少量线粒体固缩、粗面内质网水肿且囊腔扩张、可见较多溶酶体(B2)。D-半乳糖模型+电针组线粒体水肿、空泡化和粗面内质网扩张等减轻。结论：1. 颈背部连续注射 D-半乳糖(300 ㎎/㎏•d)六周可有效导致听皮层、DCN 的老化。2. 豚鼠听皮层的老化可能与BDNF、GAP-43 表达降低所导致的听皮层可塑性下降有关。3. 针刺听宫和翳风两个穴位可通过增加BDNF、GAP-43的表达,在一定程度上延缓D-半乳糖所致的豚鼠听觉皮层的老化过程。4. DCN的老化可能与GAD的表达降低有关。针刺听宫和翳风两个穴位可通过增加DCN中GAD的表达,从而使得GABA合成增加,进而增强GABA 抑制作用,延缓D-半乳糖致年龄相关性聋豚鼠DCN的老化过程。5. 针刺听宫和翳风二穴位可能通过调节DCN神经元和突触的可塑性,有效拮抗D-半乳糖所引起的DCN老化,延迟年龄相关性聋的发生。

目录

中文摘要

英文摘要

前言

实验一电针耳穴对年龄相关性聋豚鼠听皮层老化的影响及机制研究

1. 材料和方法

2 统计分析

3 结果

4 讨论

实验二电针对年龄相关性聋豚鼠蜗神经背核老化的影响及机制研究

1 材料和方法

2 统计分析

3 结果

4 讨论

结论

参考文献

英汉缩略词对照表

致谢

老年性聋遗传易感性候选基因

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