一氧化氮对悬浮红细胞变形性的影响机制研究

摘要

一氧化氮(NO)在生物体内作为一种反应性极强的自由基,具有广泛的生理作用。NO通过结合红细胞血红蛋白(Hb)中保守的β93Cys残基(Hbβ93Cys)形成S-亚硝基血红蛋白(SNO-Hb)。而Hb分子内NO能从血红素转移至Hbβ93Cys巯基,调节NO的贮存与释放,介导血管舒张。库血红细胞随着保存时间的延长,NO会发生大量流失,导致红细胞扩血管活性、红细胞变形能力及血红蛋白携氧能力等生理活性下降。因此,了解红细胞存储过程中NO的流失问题,认识NO在循环系统中的作用机理,对保障红细胞输注的安全性和有效性具有极其重要理论意义和临床价值。本研究拟通过补充NO来改善红细胞的形态和功能,,探讨NO对红细胞形态学的影响机制,为红细胞的有效保存,提供可参考的理论依据。
　　目的:本次实验对保存期间的悬浮红细胞补充不同浓度梯度的NO试剂:L-Arginine(L-精氨酸/NO前体),分析悬浮红细胞不同保存时相的红细胞变形性相关指标,以期探讨NO与库血红细胞变形性的影响机制,从而进一步评价储存悬浮红细胞的储存质量。
　　方法:取10例各1u新鲜悬浮红细胞,每例分装成4mL/管,总计500管,进行编组编号,保存于专用储存冰箱内。在储存的不同时相(3h、1d、3d、5d、7d、14d、21d、28d),每例样本各取5管,其中1管不做处理,为对照组(A组),另外4管分别和不同浓度L-精氨酸(NO前体)混合培养,浓度分别为1μM(B)、5Μm(C)、10Μm(D)、50Μm(E)。培养1小时后测定观察指标。主要有:(1)红细胞变形性相关指标:血液高切粘度、低切粘度、卡松粘度、血浆粘度、红细胞变形指数、聚集指数、刚性指数:(2)NO荧光探针:通过测定平均荧光强度(PKPosX)反应红细胞内的一氧化氮水平。
　　结果:保存期内对照组和实验组红细胞变形指数、聚集指数和刚性指数均随着时间延长而逐渐增高,且变化显著。对照组高切相对粘度在存放1d后出现升高,随后维持相同数值,递增趋势不明显;低切粘度在3h—5d期间无显著差异,14d-21d期间持续升高;卡松粘度在(5d、7d、14d、21d)时间点呈逐渐升高的趋势。当NO前体浓度为5μM时能够明显改善保存14d内的库血红细胞变形性指数和3d-7d内的刚性指数;NO前体浓度为10μM时,能明显改善保存3d-21d内红细胞变形性指数,14d-21d内的刚性指数;不同浓度的NO对红细胞聚集性指数均没有影响。高于相应的最佳NO浓度范围的时,红细胞变形指数受损。
　　结论:悬浮红细胞随着保存时间的延长,红细胞变形能力会逐渐降低。NO对库血红细胞具有调控作用,通过补充最佳浓度的NO(如5μM)时,会使红细胞变形性增加。

目录

封面

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中文摘要

英文摘要

前言

材料与方法

1 实验材料与仪器

2 主要实验试剂

3 主要实验仪器

4实验方法

5 统计学处理

讨论

1 对照组悬浮红细胞保存期间NO含量的变化

2 对照组悬浮红细胞保存期间血液流变学的变化

3实验组悬浮红细胞保存期间血液流变学的变化

结论

参考文献

英汉缩略词对照表

致谢

红细胞变形性及其对输血的影响

1 红细胞的形态及变形性

2 红细胞的变形能力在输血治疗中的意义

3 影响红细胞变形能力的因素

参考文献