阿利吉仑、厄贝沙坦、氨氯地平对动脉粥样硬化合并肾动脉狭窄大鼠抗炎症性肾脏保护作用的对比研究

摘要

背景及目的：由于人口老龄化以及不良生活方式,在肾动脉狭窄病因中,动脉粥样硬化所占比例增至71.9％，最终导致终末期肾脏病(end stage renal disease,ESRD)。研究发现动脉粥样硬化所致肾动脉狭窄程度与肾损害严重程度并非完全平行；推测动脉粥样硬化所致肾动脉狭窄慢性肾损害可能是由血管狭窄以外的其他因素所致，炎症反应可能是肾损害进展的重要机制之一，且发现动脉粥样硬化斑块稳定性与肾损害严重程度有密切关系。不规则趋化因子(Fractalkine,FKN)是具有粘附活性的趋化因子,参与白细胞特别的游走和活化。内皮细胞释放的趋化因子FKN与其受体CX3CR1结合以后,具有促进动脉粥样硬化的形成和影响动脉粥样硬化斑块的稳定性的作用。此外,FKN在原发性和继发性肾脏疾病等多种炎症性疾病中表达增加并发挥重要作用,但目前尚无动脉粥样硬化性肾动脉狭窄炎症性肾损害与FKN相关性报道。抗高血压药物具有降低动脉压,减少靶器官损伤的作用,但其在动脉粥样硬化性肾动脉狭窄中的应用尚存在争议,它是否具有减轻炎症性肾损害的作用及对Fractalkine和CX3CR1的干预作用值得进一步研究。为此,通过复制动脉粥样硬化合并肾动脉狭窄动物模型，测定血清肌酐值、血浆肾素活性(PRA)，观察狭窄侧肾脏炎症趋化因子FKN及其受体CX3CR1的分布，测定其量的变化，探讨Fractalkine-CX3CR1与动脉粥样硬化炎症性肾损害之间的相关性及直接肾素抑制剂阿利吉仑、Ang II受体抑制剂厄贝沙坦、钙通道阻滞剂氨氯地平对其损伤性的干预作用，为动脉粥样硬化性肾动脉狭窄肾损害的提供新的治疗靶点。
　　方法：1、复制动脉粥样硬化合并肾动脉狭窄动物模型:SD大鼠随机分为1K1C组、2K1C组及假手术组，平行针灸针缩窄法建立1K1C、2K1C模型后予注射VitD3+高脂喂养10周。2、阿利吉仑、厄贝沙坦、氨氯地平对动脉粥样硬化合并肾动脉狭窄大鼠抗炎症性肾脏的保护作用:分别予生理盐水、阿利吉仑、苯磺酸氨氯地平、厄贝沙坦灌胃4周后处死大鼠,分几个部分进行如下实验:(1)采集血液,然后生化分析仪测定血肌酐值,放射免疫法测定PRA;(2)取SD大鼠狭窄侧肾脏,一部分石蜡包埋做PAS染色;一部分-70℃冷冻保存;(3)免疫组织化学法检测Fractalkine及其受体CX3CR1的表达:取狭窄侧肾脏石蜡切片,采用SABC法,分别检测Fractalkine、CX3CR1在狭窄侧肾脏的表达变化,黄色区域视为阳性,Image-pro plus6.0软件分析图像;(4)RT-PCR法检测Fractalkine mRNA及CX3CR1 mRNA的表达:取冷冻保存的肾脏组织经RNA提取、逆转录、PCR、电泳, Quangtity one软件分析条带灰度值。
　　结果：1、各组大鼠药物干预后血压变化情况:各组SD大鼠在药物干预四周后,在同种造模方式下,药物干预组较生理盐水组血压明显下降,差异具有显著性(P<0.05),但各种药物降压效果差异不显著。2、三种抗高血压药物对大鼠肾功能影响:各组大鼠喂养14周后,在同种造模方式下,2K1C阿利吉仑组与2K1C厄贝沙坦组较生理盐水血肌酐升高水平明显下降,差异有显著性(P<0.05),其中，阿利吉仑组较厄贝沙坦组下降更显著(P<0.05)。阿利吉仑并未引起1K1C组肌酐的升高,而1K1C厄贝沙坦组肌酐则显著升高。与阿利吉仑组比较,氨氯地平差异亦具有显著性(P<0.05)。3、三种抗高血压药物对 PRA分泌调节的作用:各组大鼠血浆肾素水平在进行干预处理后,2K1C生理盐水组较假手术生理盐水组PRA显著升高(P<0.05);与生理盐水组比较,阿利吉仑组血浆肾素活性明显下降(P<0.05),苯磺酸氨氯地平组明显升高(P<0.05);与阿利吉仑组比较,差异亦具有显著性(P<0.05),而厄贝沙坦组与氨氯地平组间比较差异不显著(P>0.05)。4、免疫组化检测Fractalkine及CX3CR1结果:1K1C、2K1C生理盐水组较假手术生理盐水组Fractalkine及CX3CR1在肾小管的表达均显著增加(P<0.05),同种造模方式下,阿利吉仑组、厄贝沙坦组、氨氯地平组较生理盐水组Fractalkine及CX3CR1的表达量下调(P<0.05),以2K1C阿利吉仑组下调尤为明显,而2K1C厄贝沙坦组与2K1C氨氯地平组比较差异亦具有显著性(P<0.05),2K1C阿利吉仑组较1K1C阿利吉仑组Fractalkine及CX3CR1表达量减少较显著(P<0.05)。5、RT-PCR法检测Fractalkine mRNA及CX3CR1 mRNA的表达,以目的条带灰度值/内参条带灰度值表示,阿利吉仑组与厄贝沙坦组较生理盐水组 Fractalkine及CX3CR1表达均显著下降(P<0.05),而氨氯地平1K1C和2K1C组表达比较差异并无统计学意义(P>0.05),与免疫组化结果一致。
　　结论：1、Fratalkine及CX3CR1在动脉粥样硬化合并肾动脉狭窄大鼠肾脏表达增加,炎症因素可能参与了动脉粥样硬化合并肾动脉狭窄肾损伤过程。2、直接肾素抑制剂阿利吉仑、AT1受体拮抗剂厄贝沙坦以及钙通道阻滞剂苯磺酸氨氯地平具有相似的降压作用,但阿利吉仑可显著降低实验大鼠PRA,这可能对抗动脉粥样硬化作用有利。3、直接肾素抑制剂阿利吉仑、AT1受体拮抗剂厄贝沙坦、钙通道阻滞剂苯磺酸氨氯地平均可下调1K1C、2K1C大鼠肾脏炎症趋化因子Fractalkine及其受体CX3CR1的表达，但以阿利吉仑2K1C组作用显著，提示，阿利吉仑在动脉粥样硬化合并肾动脉狭窄所致炎症性肾损伤中的作用可能具有优越性。

目录

封面

目录

中文摘要

英文摘要

前 言

材料和方法

1 实验动物

2 主要试验试剂及配制

3 主要实验仪器

4 实验方法

结果

1、实验大鼠肾脏PAS染色结果

2、药物干预四周后各组大鼠血压变化情况

3、 实验大鼠生化指标的检测

4、免疫组织化学法检测各组大鼠肾脏Fractalkine，CX3CR1表达

6、RT-PCR法检测各组大鼠肾脏Fractalkine，CX3CR1表达

讨 论

1、动脉粥样硬化性肾动脉狭窄导致肾损伤机制的探讨

2、Fractalkine及其受体CX3CR1与动脉粥样硬化合并肾动脉狭窄炎症性肾损害的关系

3、各类降压药物对动脉粥样硬化合并肾动脉狭窄炎症性肾损害的保护作用

结 论

参考文献

英汉缩略词对照表

Fractalkine/CX3CR1与动脉粥样硬化*

1.FKN/CX3CR1结构和分布

2. FKN/CX3CR1与动脉粥样硬化

3．总结与展望

参考文献