膜联蛋白A2在肝肺综合症大鼠血清致肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用及机制研究

摘要

背景与目的：肝肺综合症(hepatopulmonary syndrome,HPS)是慢性肝病导致肺微血管病变引起动脉血氧合障碍的一种综合病征。肺血管重塑是肺微血管病变的主要病理变化,寻找调控HPS肺血管重塑的靶蛋白是目前研究的重点。膜联蛋白A2(annexin A2, ANXA2)是钙依赖的磷脂结合蛋白超家族成员,参与调节多种细胞的分化、增殖、迁移和凋亡,在多个生命过程中发挥重要作用。本研究拟探讨 ANXA2 在 HPS 大鼠血清致肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterial smooth muscle cells,PASMCs)增殖中的作用,为阐明HPS肺血管重塑的分子机制及其防治提供依据。方法：原代培养大鼠PASMCs并鉴定后,随机分为2组：对照组(C组)和HPS组,分别用正常大鼠血清培养C组PASMCs,HPS大鼠血清培养HPS组PASMCs,两组PASMCs于血清中孵育24、48、72 h。采用氚-胸腺嘧啶核苷掺入法(3H-TdR)、噻唑蓝比色法(MTT)检测大鼠PASMCs增殖变化,分别用RT-PCR和western blot检测大鼠PASMCs中ANXA2 mRNA及其蛋白表达含量变化；运用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术将ANXA2基因沉默,观察对HPS大鼠血清致PASMCs增殖的影响,并用western blot检测ERK1/2、NF-κB磷酸化水平。结果：HPS组PASMCs在血清孵育24、48、72 h的3H-TdR以及 MTT 检测值明显高于 C 组各时间点,差异具有统计学意义(P<0.05),且随大鼠血清作用时间延长,HPS组PASMCs 3H-TdR以及MTT检测值增加更为明显；两组均检测出ANXA2 mRNA及其蛋白的表达,但与C组比较,HPS组PASMCs内ANXA2 mRNA及其蛋白表达明显增加(P<0.05),且随时间延长,表达量增加更明显。siRNA下调ANXA2表达后,再经HPS大鼠血清孵育,PASMCs MTT以及 3H-TdR掺入量明显低于对照组(P<0.05)。与C组比较,HPS大鼠血清可致ERK1/2、NF-κB磷酸化水平明显升高(P<0.05)；而下调ANXA2表达后,HPS大鼠血清致ERK1/2、NF-κB磷酸化明显低于对照组(P<0.05)。结论：HPS 大鼠血清可致 PASMCs 异常增殖；HPS大鼠血清通过ANXA2介导促增殖信号ERK1/2、NF-κB活性改变可能是PASMCs异常增殖的机制之一。

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前言

第一部分 HPS大鼠血清对PASMCs增殖以及对ANXA2表达的影响

材料与方法

结果

讨论

第二部分 下调PASMCs ANXA2表达实验研究

材料与方法

结果

讨论

第三部分 下调ANXA2表达对HPS大鼠血清致PASMCs增殖以及下游ERK1/2、NF-κB活性的影响

材料与方法

结果

讨论

全文结论

参考文献

英汉缩略词对照表

致谢

膜联蛋白A1/A2膜聚集在肝源性肺血管重塑中的研究进展

研究生期间发表的论文

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