侧脑室注射P63抗体对大鼠脑缺血后P63和P53表达及神经元凋亡的影响

摘要

目的:观察侧脑室注射P63抗体对大鼠全脑缺血后海马CA1区P63和P53表达及神经元凋亡的影响,探讨p63在脑缺血缺氧后P63和P53表达及神经元凋亡中的作用,为脑缺血缺氧后神经元凋亡的防治提供新的理论依据。
　　方法:雄性SD大鼠75只,按随机数字法随机等分为三组:假手术(A)组、缺血(B)组、抗体(C)组。神经行为学评分大于16分的大鼠纳入本实验研究。假手术(A)组行侧脑室注射人工脑脊液但不行全脑缺血处理;缺血(B)组行侧脑室注射人工脑脊液及全脑缺血处理;抗体(C)组行侧脑室注射P63抗体及全脑缺血处理。三组实验大鼠分别于术后6h、12h、24h、48h、72h行神经行为学评分。大鼠神经行为学评分后行2％戊巴比妥钠麻醉,4%多聚甲醛灌注并取脑,脑组织切片分别行HE染色和TUNEL染色以测定海马CA1区神经元密度和神经元凋亡指数;免疫组化检测海马CA1区P63和P53的表达,并对两种蛋白的表达水平作半定量分析。
　　结果:1.动物模型的构建:本实验中有7只大鼠死亡:5只死于术中呼吸心跳骤停,2只于术后未到取材时间点而死亡,均予以补充,共有75只大鼠纳入统计分析。
　　2.神经行为学评分:75只大鼠术前的神经行为学评分均正常(16～20分)。A组大鼠术后各时点的神经行为学评分均在正常范围。B组和C组大鼠在术后各时点的神经行为学评分显著低于术前(p<0.01),术后各个时点评分以72h最低(p<0.05)。而C组大鼠术后6h评分与B组无差异,其后各个时点的神经行为学评分显著高于B组(p<0.01)。
　　3.神经元密度:A组大鼠术后各时点海马CA1区神经元密度无明显差异(p>0.05)。B组和C组大鼠与A组比较,术后6h、12h、24h、48h、72h神经元密度明显降低(p<0.05),其中术后72h神经元密度最低(p<0.05)。而C组大鼠术后各时点神经元密度明显高于B组(p<0.05)。
　　4.神经元凋亡:A组大鼠术后各时点海马CA1区仅见极少量凋亡细胞。而B组和C组大鼠与A组比较,术后6h、12h、24h、48h、72h海马CA1区凋亡细胞指数显著升高(p<0.01),其中术后48h凋亡指数最高(p<0.05)。而C组大鼠海马CA1区凋亡细胞指数明显小于B组(p<0.05)。
　　5.P63和P53的表达:A组大鼠术后各时点海马CA1区仅见少量P63和P53表达。B组和C组大鼠与A组比较,术后各时点海马CA1区P63和P53表达显著增多(p<0.01)。P63在术后6h表达开始增加,于术后48h时达峰值,随后表达降低。P53在术后6h表达开始增多,24h时表达达高峰,随后表达逐渐降低。B组和C组大鼠比较,术后各时点P53表达无明显差异(p>0.05),但C组大鼠P63表达明显低于B组(p<0.05)。
　　6.相关分析:大鼠脑缺血再灌注损伤后海马CA1区P63与P53的表达呈正相关(r=0.592,p<0.01);P63的表达与脑缺血后神经元凋亡呈正相关(r=0.853,p<0.01);P53的表达与脑缺血后神经元凋亡呈正相关(r=0.852,p<0.01)。
　　结论:1.大鼠脑缺血后海马CA1区P63与P53表达均明显增加,侧脑室注射P63抗体能减少P63表达但对P53表达无明显影响。
　　2.侧脑室注射P63抗体能减少大鼠脑缺血后的神经元凋亡,改善神经行为学评分而具有神经保护作用。
　　3.大鼠脑缺血后海马CA1区P63表达、P53表达和神经元凋亡三者均呈正相关。

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中文摘要

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前言

材料与方法

1 实验材料与仪器

2 主要实验试剂

3 主要实验仪器

4 实验方法

5 统计学方法

结果

1 模型建立

2 大鼠神经行为学评分

3 大鼠生命体征变化情况

4 大鼠海马CA1区神经元密度

5 大鼠海马CA1区神经元凋亡

6 海马CA1区P63及P53表达

7 海马CA1区P63、P53及神经元凋亡三者之间的相关性

讨论

1 大鼠脑缺血再灌注损伤动物模型的构建

2侧脑室注射药物的中枢作用

3侧脑室注射P63抗体对脑缺血后海马CA1区P63 及P53表达水平的影响

4 相关性分析

结论

参考文献

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致谢

p63与细胞凋亡的研究进展

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