妊娠期高血压疾病患者肠系膜动脉平滑肌细胞BKCa的改变

摘要

目的:妊娠期高血压疾(hypertensive disorders complicating pregnancy，HDCP)是产科严重并发症，也是导致孕产妇及围产儿病死率升高的主要原因。该疾病组分类复杂，病因病机也未阐明清楚。许多学者认为该疾病是母体，胎儿，胎盘等众多因素作用下，发生的全身小血管痉挛，内皮损伤及局部缺血[1]。血压升高是该疾病最突出的临床症状，也是衡量该疾病严重程度的标准之一。研究发现，血管平滑肌细胞上的离子通道参与了血管张力调节，其中大电导钙激活钾通道(large conductance calcium-activatedpotassium channels，BKCa)扮演着重要角色[2]。当BKCa被持续激活，细胞膜发生超级化，电压依赖性钙通道的活性受到抑制，减少了Ca2+的内流，血管舒张，血压下降[3]。BKCa对血管平滑肌静息膜电位的维持上起着主要作用。肠系膜动脉为微小动脉，是形成血管外周阻力的主要组成部分，对血压的变化具有重要影响。本实验采用单通道膜片钳技术，观察妊娠期高血压疾病患者肠系膜动脉血管平滑肌细胞BKCa的单通道电流，了解该疾病中肠系膜动脉平滑肌细胞BKCa功能活动是否改变，认识妊娠期高血压疾病与肠系膜动脉平滑肌细胞BKCa活性的相关性，为进一步研究该病的病因病机提供理论依据。方法:1.选择内径为1～2mm的肠系膜动脉，剥除血管周围脂肪结缔组织，纵向剖开，剪成2 mm×2 mm的组织块，两步急性酶分离法分离出单个平滑肌细胞。选择胞膜完整，立体感强，贴壁良好的细胞进行实验。采用单通道膜片钳技术记录平滑肌细胞BKCa单通道电流。电流信号经膜片放大器放大处理，1KHz低通滤波，在软件pClamp10.1支持下，通过12位A/D、D/A转换器记录并储存到计算机，Clampfit软件系统对数据进行分析。采样频率为10KHz，采样方式为Gap Free。观察并比较妊娠期高血压疾病(hypertensive disorders complicating pregnancy，HDCP)组、正常晚期妊娠(normal late pregnancy，NLP)组、非妊娠(no pregnancy，NP)组的BKCa单通道电流差异。结果:1.采用两步急性酶分离法分离人肠系膜动脉，能获得数量较多、质量较高的平滑肌细胞，满足实验要求。2.本实验记录到的人肠系膜平滑肌细胞BKCa单通道电流信号特性:大电导性，电压依赖性，钙离子浓度依赖性，能被BKCa通道特异性阻断剂IbTX阻断。3.三个组肠系膜动脉平滑肌细胞BKCa单通道电流功能活动的比较:(1)妊娠期高血压组（HDCP组）BKCa单通道电流的电导值明显低于其他两组，差异有统计学意义(P＜0.05)。(2)在细胞贴附式膜片下，三个组肠系膜动脉平滑肌细胞BKCa单通道电流的功能活动不同，差异有统计学意义(P＜0.05)。HDCP组BKCa单通道电流的电流幅值(Amp)比NLP组和NP组明显降低，差异具有统计学意义(P＜0.05)。NLP组与NP组比较，差异不具有统计学意义（P＞0.05）。NLP组BKCa单通道电流的开放概率(Po)最大，HDCP组BKCa单通道电流的开放概率(Po)则最小，即PoNLP组＞PoNP组＞PoHDCP组，差异具有统计学意义（P＜0.05）。NLP组BKCa单通道电流的平均开放时间(To)最长，HDCP组BKCa单通道电流的平均开放时间(To)最短，即ToNLP组＞ToNP纽＞ToHDCP组，差异具有统计学意义(P＜0.05)。HDCP组BKCa单通道电流的平均关闭时间(Tc)比NLP组和NP组明显延长，差异具有统计学意义(P＜0.05)。NLP组与NP组比较，差异不具有统计学意义(P＞0.05);(3)用内面向外式膜片方式下，膜电位为+40 mV，随浴液中游离Ca2+浓度增加(10-8M、10-7M、5×10-7M、10-6M、10-5M)，三个组肠系膜动脉平滑肌细胞BKCa单通道电流的功能活动变化不同，差异有统计学意义(P＜0.05)。HDCP组BKCa单通道电流的电流幅值(Amp)、开放概率(Po)、平均开放时间(To)与NLP组相比较，明显降低，差异有统计学意义（P＜0.05），平均关闭时间(Tc)比NLP组明显增加，差异有统计学意义(P＜0.05);HDCP组BKCa单通道电流的电流幅值(Amp)、开放概率(Po)、平均开放时间(To)与NP组相比较，明显降低，差异有统计学意义(P＜0.05)，平均关闭时间(Tc)比NP组明显增加，差异有统计学意义(P＜0.05);这种差异在NLP组和NP组之间不明显，不具有统计学意义(P＞0.05)。结论:1.本实验采用两步急性酶分离法，获得数量较多、质量较高的人肠系膜动脉平滑肌细胞，适用于单通道膜片钳实验。2.本实验所记录的人肠系膜动脉平滑肌细胞BKCa单通道电流，具有大电导性、电压依赖性、钙浓度依赖性等特性。3.妊娠期肠系膜动脉平滑肌细胞BKCa活性增强，以维持血压平衡和满足妊娠的需要。4.妊娠期高血压疾病患者的肠系膜动脉平滑肌细胞BKCa活动减弱，推测肠系膜动脉平滑肌细胞BKCa通道的活性改变与妊娠期高血压疾病的发生具有相关性。

目录

摘要

前言

材料与方法

1 研究对象

2 主要实验溶剂

3 主要实验试剂

4 主要主要实验仪器

5 主要实验方法

结果

1 两步急性酶分离的人肠系膜动脉平滑肌细胞

2 人肠系膜动脉平滑肌细胞BKCa单通道特性

3 HDCP组、NLP组、NP组妇女肠系膜动脉平滑肌细胞BKCa活性差异的比较

讨论

1 急性酶分离人肠系膜动脉平滑肌细胞的方法

2 妊娠期血管平滑肌细胞BKCa活性的变化

3 妊娠期高血压疾病中血管平滑肌细胞BKCa活性的变化

4 展望

结论

参考文献

英汉缩略词对照表

致谢

钾通道与妊娠期高血压疾病关系的研究进展 综述

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