直接肾素抑制剂对大鼠急性胰腺炎的保护作用及机制的实验研究

摘要

目的:观察直接肾素抑制剂（阿利吉仑）在大鼠急性胰腺炎(Acutepancreatitis，AP)模型中对大鼠的血清淀粉酶（serum amylase，AMY）、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)、血浆肾素活性（plasma renin activity，PRA）、血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ，AngⅡ)水平的影响，以及其对大鼠胰腺组织中核因子-κB(nuclear factor kappa-B，NF-κB)和血管紧张素Ⅱ1型受体(AngiotensinⅡ type1 receptor，AT1R)表达的影响，探讨抑制肾素-血管紧张素系统(ReninAngiotensin System，RAS)起始环节对大鼠急性胰腺炎的保护作用及可能机制。
　　方法:72只成年健康Spague-Dawlay(SD)大鼠随机分为三组:假手术组（SO组，n=24）、急性胰腺炎组（AP组，n=24）、阿利吉仑（锐思力，Rasilez）治疗组（R组，n=24），每组各共计24只。AP组和R组大鼠急性胰腺炎模型均采用3.5％牛磺胆酸钠（0.1ml/100g）逆行胰胆管注射制备。而SO组仅开腹稍翻动肠管和胰腺后关腹。R组于造模后立即给予阿利吉仑（锐思力）溶液灌胃(20mg/ kg)，SO组及AP组在造模后，给予同等剂量的生理盐水灌胃。各组大鼠于术后6h，12h，24h，分批次等数量（8只/组/批）下腔静脉抽血后处死。各组大鼠分别取胰腺组织进行苏木精-伊红染色（Haematoxylin and eosin stain，HE），观察胰腺病理改变和进行病理学评分;下腔静脉血离心后测定各组大鼠AMY、TNF-α、AngⅡ、PRA的变化;免疫组化方法观察胰腺组织AT1R、NF-κB的表达情况。所有实验数据用SPASS13.0统计软件进行分析。
　　结果:1.胰腺组织病理改变:(1)肉眼观:SO组大鼠胰腺呈粉红色、质软、光泽度好，且随着时间延长未见明显水肿，未见出血坏死，腹腔内无腹水及皂化斑，三个时间点大鼠胰腺未见明显变化。AP组在造模后随即可见沿胰胆管走形区域出现充血、水肿，范围逐渐加大，颜色逐渐加深。随着时间延长，6h大鼠胰腺肿胀明显、色泽变淡、呈暗红色，无光泽，少量腹水及胰腺表面皂化斑的形成;12h可见大鼠胰腺出血坏死、呈暗褐色，胰腺及网膜皂化斑的增多，且胰腺与相邻脏器粘连明显，胃肠胀气亦明显，同时可见较多血性腹水形成;24h大鼠胰腺呈暗褐色，广泛的坏死出血及钙化灶形成，与周围脏器大量粘连，胃肠淤张胀气更为明显，可见大量血性腹水。R组各时间点与AP组同一时间点相比，胰腺水肿、出血、坏死、皂化斑的形成及腹水量均减轻。(2)光镜下观:SO组胰腺小叶结构基本完整，间质轻度水肿，少量炎性细胞浸润，且三个时间点胰腺组织镜下所见无明显差异。AP组6h胰腺小叶结构紊乱、间质水肿，小叶间隔稍增宽，有炎症细胞浸润;12h可见胰腺小叶结构明显紊乱、间质明显水肿，小叶间隔明显增宽,部分小叶结构破坏，片状坏死、出血，大量炎症细胞浸润;24h可见胰腺病理损伤程度加重，小叶结构消失，大量炎细胞浸润，呈现大片状出血、坏死，部分见脂肪液化坏死及腺泡细胞固缩、崩解，部分小叶甚至成为一片红染的无结构区。R组与AP组同一观察时间点病理变化大体类似，但胰腺小叶间隔、炎细胞浸润、出血、坏死等病变程度减轻。2.胰腺组织病理学评分:与SO组比较，AP组各时间点胰腺组织病理评分显著升高(P＜0.05);而R组各时间点较AP组有明显降低(P＜0.05)，但仍高于SO组(P＜0.05)。3.AMY、TNF-α、AngⅡ、PRA的变化:与SO组比较，AP组各个时间点，上述指标显著升高(P＜0.05);而R组各时间点较AP组有明显降低(P＜0.05)，但仍高于SO组(P＜0.05)。4.胰腺组织中NF-κB和AT1R的表达:SO组各时间点NF-κB和AT1R的表达很少;与AP组、R组各时间NF-κB和AT1R的表达较SO组明显的升高(P＜0.05);R组各时间NF-κB和AT1R的表达低于AP组(P＜0.05)。
　　结论:1.直接肾素抑制剂（阿利吉仑）对大鼠急性胰腺炎的炎症病变及损伤具有一定保护作用;2.AngⅡ为RAS的主要效应分子，可以激活NF-κB炎症信号转导通路，促进TNF-α等炎症介质的合成和释放，在急性胰腺炎的病损过程中起着重要作用;3.活性肾素作为RAS首位环节限速酶，其对RAS主要活性分子AngⅡ的生成起着重要调控作用，直接肾素抑制剂（阿利吉仑）可以通过抑制该酶的催化活性减少AngⅡ的生成，弱化AngⅡ的病损作用;4.肾直接素抑制剂（阿利吉仑）也可能直接减少NF-κB的表达，抑制炎症信号通路活化所致的炎症瀑布效应。

目录

摘要

前言

材料和方法

1 实验材料

2 主要实验试剂

3 主要实验仪器

4 实验方法

5 统计学处理

结果

1 胰腺组织病理学改变和病理学评分

2 大鼠AMY、TNF-α、Ang Ⅱ、PRA水平变化及比较

3 免疫组化方法观察胰腺组织AT1受体、NF-κB的表达情况

讨论

1 RAS在急性胰腺炎中的发病机制

2 RAS抑制剂在急性胰腺炎中的调控作用

3 直接肾素抑制剂(阿利吉仑)对RAS的影响

4 直接肾素抑制剂(阿利吉仑)对大鼠急性胰腺炎的影响

结论

参考文献

英汉缩略词对照表

致谢

肾素-血管紧张素系统在急性胰腺炎中的调控作用 综述

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