含川芎嗪玻璃化冻存液对组织工程化神经治疗大鼠坐骨神经缺损影响的实验研究

摘要

目的:探讨利用含川芎嗪的玻璃化冻存液冻存的大鼠异体神经与神经干细胞(NSCs)联合移植治疗大鼠坐骨神经长节段缺损的作用和机制。
　　方法:(1)分离、培养、纯化并AD-GFP转染来自新生SD大鼠大脑皮层的NSCs。(2)将24只成年Wistar大鼠的双侧坐骨神经截取1.5cm长节段，共得48条神经段，随机分为两组冻存，即含川芎嗪的玻璃化冻存液-196℃冻存3周（供C组用），和不含川芎嗪的玻璃化冻存液-196℃冻存3周（供B组用）。(3)将72只成年SD大鼠（雌雄不限）统一制作为右侧1.5cm坐骨神经缺损模型，然后随机分为A、B、C三组，每组24只:C组（实验组）:将含川芎嗪玻璃化冻存液冻存后的大鼠异体坐骨神经端端缝合到大鼠一侧坐骨神经1.5厘米缺损模型上，并通过微量注射器行神经外膜下注射浓缩的基因修饰NSCs。A组（对照组）:将切下的坐骨神经倒转后原位端端缝合，于神经外膜下注射相同体积生理盐水。B组（对照组）:将单纯普通冻存液冻存后的大鼠异体坐骨神经端端缝合到大鼠缺损坐骨神经上，于神经外膜下注射相同体积神经干细胞培养液。(4)术后2、4、8、12周观察大鼠的坐骨神经功能恢复指数(SFI)、坐骨神经传导速度(NCV)、小腿三头肌湿重比（患侧/健测）、移植神经横断面髓鞘面积比例、移植神经段组织学观察。(5)数据采用SPSS19.0统计分析，图片采用IPP图像分析软件分析，各组间比较采用方差分析及LSD法，结果以均数±标准差表示，P＜0.05为有统计学意义。
　　结果:(1) NSCs生长分化良好，可传代至10代以上，行AD-GFP转染后转染率高达95％以上;(2)术后12周SFI:A组为-64.89±4.76，B组为-73.22±3.21，C组为-69.31±2.13，A、B、C三组间比较F=9.36，p=0.002＜0.05，A组＞C组＞B组;术后12周NCV:A组为19.72±1.61，B组为16.91±0.48，C组为18.27±0.78，A、B、C三组间比较F=10.36，p=0.001＜0.05，A组＞C组＞B组。小腿三头肌湿重比（患侧/健测）:A组为0.68±0.08，B组为0.57±0.05，C组为0.65±0.05，A、B、C三组间比较0.65±0.05，A组、C组＞B组，A组、C组间无统计学差异。移植神经横断面髓鞘面积比例:A组为45.66±1.28，B组为36.47±1.33，C组为41.85±1.39，A、B、C三组间比较F=71.58，p=0.00＜0.05，A组＞C组＞B组。C组（实验组）移植神经段荧光显微镜观察可见Ad-GFP转染的神经干细胞存活并分化为神经元及神经胶质细胞，A、B组移植神经段荧光显微镜下未见荧光。移植神经段大体观察A组及C组桥接神经直径较B组更接近原坐骨神经，且神经外膜血管生长跨过桥接神经吻合口，2、4、8周组相较无显著性差异。
　　结论:1、新生SD大鼠大脑皮层组织能提取、培养与传代大量神经干细胞，并能在EGF、bFGF、B27缓慢消耗的情况下分化为多种功能细胞。经AD-GFP病毒转染后，神经干细胞传代及分化未受影响;2、神经干细胞可与含川芎嗪的玻璃化冻存液冻存的异体坐骨神经在受体大鼠体内共存并分化成神经元细胞及神经胶质细胞，促进神经修复，减轻肌萎缩;3、含川芎嗪的玻璃化冻存液冻存的异体神经与NSCs联合移植可促进大鼠坐骨神经缺损的修复。

目录

摘要

前言

参考文献

第一部分：NSCs体外培养及鉴定、标记的实验研究

材料与方法

结果

讨论

参考文献

附图

第二部分：含川芎嗪的玻璃化冻存液冻存的大鼠异体坐骨神经联合NSCs移植修复大鼠坐骨神经长段缺损

材料与方法

结果

讨论

结论

参考文献

附图

英汉缩写词对照表

致谢

神经干细胞联合组织工程化桥接物在周围神经长段缺损中的应用

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