表皮生长因子对人毛囊外毛根鞘无色素性黑素细胞增殖、迁移能力的影响

摘要

目的:观察不同浓度的表皮生长因子(Epidermal growthfactor，EGF)对毛囊外毛根鞘(out root sheath，ORS)无色素性黑素细胞(amelanotic melanocytes，AMMCs)增殖能力及迁徙能力的影响。
　　方法:与头皮提供者沟通获得同意后。取头皮并去除脂肪组织及真皮上1mm。采用1％分散酶Ⅱ消化获得毛囊。再采用0.5％胰蛋白酶消化获得外毛根鞘细胞。在含有经Chelex100钠形式螯合后的胎牛血清的专用MCDB153培养基中原代培养。采用差胰酶法传代纯化AMMC细胞。将纯化并传至第三代的细胞，用免疫组织化学染色法鉴定其NKI/beteb与HMB-45的表达。将经过纯化和鉴定后的AMMC，根据EGF的作用浓随机分为5组:0ng/ml（即空白对照组）、1ng/ml、10ng/ml、20ng/ml、50ng/ml浓度EGF干预组。(1)按照分组条件采用不同浓度EGF干预AMMC48小时后。采用CCK8检测法检测各组细胞的增殖能力。(2)将上述经鉴定后的第三代的AMMC，用无血清MCDB153饥饿24 h后，采用Transwell体外小室迁移实验检测不同浓度EGF干预AMMC48小时后各组细胞的迁移能力。所测得的结果用(x)±s统计，应用11.5版本的SPSS统计软件，行单因素方差分析。确定检验水准为P＜0.05。
　　结果:人毛囊外毛根鞘的无色素性黑素细胞在含有经Chelex100钠形式螯合后的胎牛血清以及各种添加因子的专用MCDB153培养基中可以有效的扩增。通过采用差胰酶法传代 AMMC细胞可以有效的纯化AMMC。AMMC在体外能够连续、稳定的传代。传至第三代的细胞，用免疫组织化学染色显示其NKI/beteb染色阳性。HMB-45的染色为阴性。各组CCK8检测的OD值:空白对照组0.1968±0.1763,1ng/ml EGF干预组0.2986±0.1773,10ng/ml EGF干预组0.6302±0.2292，20ng/ml EGF干预组0.7414±0.2177，50ng/ml EGF干预组0.8198±0.2604。空白对照组的OD值低于10ng/ml EGF干预组、20ng/ml EGF干预组、50ng/ml EGF干预组（P均＜0.05）。1ng/ml EGF干预组的OD值低于10ng/ml EGF干预组、20ng/ml EGF干预组、50ng/ml EGF干预组（P均＜0.05）。空白对照组与1ng/ml EGF干预组的OD值无明显差异（P＞0.05）。10ng/ml EGF干预组、20ng/ml EGF干预组、50ng/ml EGF干预组OD值无明显差异（P＞0.05）。各组Transwell体外小室迁移实验检测的迁移细胞数（个）:空白对照组5.88±2.03，1ng/ml EGF干预组6.75±2.71，10ng/ml EGF干预组22.50±5.71，20ng/ml EGF干预组54.75±6.54，50ng/ml EGF干预组55.75±6.30。空白对照组的迁移细胞数少于10ng/ml EGF干预组、20ng/ml EGF干预组、50ng/mlEGF干预组（P均＜0.05）。1ng/ml EGF干预组的迁移细胞数少于10ng/ml EGF干预组、20ng/ml EGF干预组、50ng/ml EGF干预组（P均＜0.05）。10ng/ml EGF干预组的迁移细胞数少于20ng/ml EGF干预组、50ng/ml EGF干预组（P均＜0.05）。而20ng/ml EGF干预组与50ng/ml EGF干预组的迁移细胞数无明显差异（P＞0.05）。
　　结论:在体外一定浓度的EGF可以促进AMMC的增殖和迁移。但是随着EGF浓度的升高，其促增殖、迁移作用并没有进一步增加。

目录

摘要

前言

材料与方法

1 实验材料与仪器

2 主要实验试剂

3 主要实验仪器

4 实验方法

5 统计学处理

结果

1 人外毛根鞘无色素性黑素细胞的免疫组织化学染色结果

2 CCK8试验对各浓度EGF干预组人外毛根鞘无色素性黑素细胞增值能力的检测结果

3 Transwell体外小室迁移实验对各浓度EGF干预组人外毛根鞘无色素性黑素细胞迁移能力的检测结

讨论

1 AMMC的生物学特性及其培养和鉴定

2 EGF对AMMC增殖能力与迁徙能力的影响

结论

参考文献

英汉缩略词对照表

致谢

人毛囊外毛根鞘无色素性黑素细胞与白癜风

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