免疫荧光技术检测血小板相关抗体用于免疫性血小板减少症诊断的研究

摘要

研究目的:采用免疫荧光法(IFT)对免疫性及非免疫性血小板减少症患者血小板相关抗体(PAIg)进行检测，评价IFT检测PAIgG用于诊断及鉴别诊断血小板减少症的免疫性与非免疫性的临床价值。
　　对象与方法:实验对象取自泸州医学院附属医院血液内科临床已确诊的免疫性血小板减少症患者血清30例、非免疫性血小板减少症患者血清30例，以及成年健康志愿者血清15名，将实验分为免疫性、非免疫性和正常人三组。取巨核细胞株（购自上海博研生物科技有限公司）进行细胞传代培养成巨核细胞，将上诉三组血清与正常培养的巨核细胞进行孵育后，将正常培养的巨核细胞涂片、烘干固定，用1％小牛血白蛋白(BSA)覆盖，恒温箱孵育后室温封闭，加入待检血清孵育，将异硫氰酸荧光素标记的小鼠抗人CD61(MAH-CD61-FITc)和德州红标记的山羊抗人球蛋白G(GAH-IgG-Texas Red)分别加到玻片上，进行孵育，过夜洗片，晾干。然后观察巨核细胞表面在荧光显微镜下的所显现的荧光颜色，并分析巨核细胞与GAH-IgG-Texas Red结合后的荧光灰度值。分析三组对象血清PAIgG荧光值情况水平，比较各组间的差异性，分析其意义。
　　结果:1.根据对血小板减少患者PAIgG检测后，我们通过公式计算得出:诊断免疫性血小板减少症，用免疫荧光技术定性检测的敏感度为90.0％，特异度66.7％，阳性预测值72.9％，阴性预测值86.9％，误诊率33.3％，漏诊率10.0％，诊断效率为78.3％。用IFT定量法诊断的敏感度是93.3％，特异度63.3％，阳性预测值71.8％，阴性预测值90.5％，误诊率36.7％，漏诊率6.7％，诊断效率为78.3％。2.免疫性及非免疫性血小板减少症组PAIgG水平均较健康人组升高，且免疫性血小板减少症组明显高于非免疫性血小板减少症组。
　　结论:1.用免疫荧光技术检测PAIgG对免疫性血小板减少症诊断的灵敏度和阴性预测值均较高，临床上可作为对免疫性血小板减少症的一项筛查指标，检测结果为阴性可初步排除免疫性血小板减少症;但阳性结果仍不能作为确诊依据，还需结合患者临床特点及相关检查排除，以此减少临床对免疫性血小板的漏诊误诊率。2.鉴于血小板在体外存在容易激活和聚集的特点，临床工作中及时获取一定量的血小板较困难，此次试验我们行巨核细胞培养，应用IFT检测巨核细胞与受检血清结合后的PAIgG，通过测定巨核细胞表面平均荧光灰度值，分析三组实验对象与巨核细胞结合的血清抗体含量差异有无统计学意义，结果显示更直观，排除了血液中其他抗体成分的干扰，确保实验可靠性。3.对于血小板减少症，IFT操作简单，价格低廉，有望成为取代昂贵的流式细胞术及MAIPA实验检查（单克隆抗体特异性捕获血小板抗原试验），易于推广使用。4.在对IFT的定性和定量法比较中，我们可得出两种方法的诊断效率均较高，二者无明显统计学意义，相比之下定性法更快速，直观，无需软件分析即可直接得出结果，花费相对定量法低，在临床推广使用比定量法可行性高。5.两血小板减少症组的血清PAIgG水平明显高于健康人组，而免疫组患者血清PAIgG水平升高更突出，与非免疫组之间PAIgG水平差异有统计学意义。6.是否可通过联合检测其他血小板相关抗体及血小板膜糖蛋白特异性抗体提高免疫性血小板减少症检测特异性有待于进一步研究。7.此次实验检测三组与巨核细胞结合的血清PAIgG，对免疫性血小板减少症的诊断有较高的敏感度，但不能作为原发性与继发性免疫性血小板减少症之间的鉴别。

目录

摘要

前言

材料与方法

1 试验对象及分组

2 检测指标

3 主要实验试剂及材料

4 主要实验仪器

5 实验方法

结果

1．背景资料分析

2．巨核细胞后在显微镜下观察培养结果

3．免疫荧光法(IFT)结果

讨论

结论

参考文献

缩略语中英文对照

致谢

原发性免疫性血小板减少症诊断研究新进展

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