ghrelin对脓毒症小鼠肺脏炎症及JAK/STAT(信号转导和转录激活子)通路的影响

摘要

目的:通过观察生长素释放肽(ghrelin)对腹腔内注射内毒素制作脓毒症小鼠模型肺组织炎症反应的严重程度、肺组织janus激酶/信号转导和转录激活因子STAT3mRNA基因及STAT3蛋白表达水平及促炎细胞因子TNF-α、IL-6的表达水平的影响，探讨ghrelin在脓毒症炎症反应中的调节作用，进一步阐明脓毒症的发病机制以及探讨ghrelin在调节脓毒症炎反应的作用机理，为提高脓毒症治愈率寻找新的思路。
　　方法:
　　1、通过经典脓毒症制作模型即腹腔注射内毒素(LPS)建立脓毒血症模型，采用腹腔注射外源性生长素释放肽(ghrelin200ug/kg)进行干预，腹腔注射等量生理盐水作为对照。选取雌性昆明小鼠54只，体重20-25g，随机分为3组:对照组、模型组及ghrelin干预组，每组各18只，A（对照组）处理:经腹腔注射入等量生理盐水;B（模型组）处理:经腹腔内注射入脂多糖6mg/kg;C（干预组）:先经腹腔注射入ghrelin200ug/kg，30分钟后再经腹腔注射入脂多糖6mg/kg;
　　2、各组分别于3小时、9小时及18小时随机处死小鼠各6只，留取标本行相应检测:①取各实验组右肺上叶组织，用于HE染色，光镜下观察肺组织病理变化。②左肺上叶用于酶联免疫吸附法(ELISA)测定肺组织炎症因子TNF-α、IL-6、及stat3蛋白表达水平。③RT-PCR法检查双肺下叶肺组织stat3 mRNA的基因表达。
　　3、所得数据以均数+标准差来表达，统计分析使用SPSS17软件。用单因素方差分析来比较组之间总体差异，用SNK方法比较每两组的差异，stat3与TNF-α、IL-6相关分析采用Pearson相关分析。
　　结果:
　　1、对照组小鼠肺组织HE染色光镜下肺组织结构完整，气道上皮细胞排列整齐，未见明显炎症细胞浸入，间质无水肿，无出血，无水肿液、肺泡腔完整;而模型组各时相见肺间质水肿，肺泡内有大量炎性细胞浸润，部分可并扩散到邻居肺泡中，部分上皮细胞变形脱落，毛细血管扩张淤血，间质及肺泡内出血明显，部分可见渗出物破坏肺泡结构，同时肺泡隔水肿、增厚，渗出液浸入肺泡腔内，腔内充满红细胞，局灶有肺泡膨胀不全或肺泡塌陷、融合，出现典型的脓毒血症病理改变，在造模后3小时即可见典型炎症渗出病变，尤以造模后9小时炎症反应最为严重，18小时还可见肺泡腔纤维素渗出，呈增生样改变; Ghrelin干预组肺组织病理炎症改变在各时间点均较模型组减轻。
　　2、模型组和干预组中肺组织匀浆stat3mRNA的表达在各时间点较对照组相比均显著增加，差异具有统计学意义（P值均＜0.001）;干预组中肺组织匀浆stat3mRNA的表达在各时间点较模型组均有所下降，差异有统计学意义（P值均＜0.001）。
　　3、模型组及干预组肺组织匀浆中STAT3的蛋白表达在各时相与对照组比较均升高，具有统计学差异（P值均＜0.001），干预组中肺组织匀浆中stat3的蛋白表达在各时间点较模型组均有所下降，差异有统计学意义(P值均＜0.001)。且与肺组织匀浆中stat3mRNA的变化一致。
　　4、模型组及干预组肺组织匀浆在早期就出现炎性细胞因子TNF-α和IL-6的升高，同肺组织匀浆stat3的蛋白表达的升高在时间上存在一致性，仍以9小时升高最为明显，与对照组比较存在统计学差异(P值均＜0.001)，而干预组在炎症因子TNF-α和IL-6的表达上在各时间点中均较模型组下降，差异有统计学意义（P值均＜0.001），相关分析中模型组中stat3的蛋白表达与TNF-α和IL-6在肺组织中的表达具有相关性，均成正相关，相关系数为分别为0.88、0.91。干预组中stat3的蛋白表达与TNF-α和IL-6在肺组织中的表达同样具有相关性，均成正相关，相关系数为分别为0.88、0.88。
　　结论:腹腔注射内毒素可以成功复制脓毒症小鼠模型，在复制模型后3小时即可见较重的炎症反应，最重的时期在9小时，脓毒血症后期开始出现纤维增殖，纤维素形成。给予外源性ghrelin干预可改善脓毒血症小鼠肺脏炎症细胞浸润、同时肺组织转录激活因子STAT3 mRNA基因及STAT3蛋白表达水平均同步下降，并伴有炎性细胞因子(TNF-α和IL-6)表达降低，ghrelin参与了脓毒症炎症级联放大反应的调节作用，其调节炎症反应机制可能与抑制janus激酶/信号转导和转录激活因子(jak/stat)通路、下调炎性细胞因子（TNF-α和IL-6）的表达有关。

目录

摘要

前言

材料与方法

1．实验材料与仪器

2．实验方法

结果

1．肺实质大体外观观察

2．肺组织病理学观察

3、肺组织STAT3m RNA的表达

4、肺组织中TNF-α、IL-6、stat3蛋白的浓度

讨论

结论

参考文献

英汉缩略词对照表

致谢

Ghrelin抗炎作用机制的研究进展 综述

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