溃疡性结肠炎大鼠结肠组织中c-fos表达的变化及西帕依溃结安免疫保护机制的研究

摘要

目的：建立溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis，UC)的大鼠模型，研究UC大鼠结肠组织中c-fos表达的变化及西帕依溃结安的免疫保护机制；为应用RNA干扰(RNA interference，RNAi)技术探讨UC发病的敏感点及维药西帕依溃结安治疗作用靶点，构建大鼠c-fos基因的真核表达载体。方法：健康Wistar大鼠分为正常组(n=10)、溃疡性结肠炎模型组(n=11)、西帕依溃结安干预组(n=14)、5-氨基水杨酸组(阳性对照组，n=14)及生理盐水组(阴性对照组，n=15)共5组，用2、4-二硝基氯苯(2，4-dinitrochlorobenzene，DNCB)与乙酸复合法制备大鼠溃疡性结肠炎模型。采用RT-PCR和Western blot的方法检测大鼠结肠组织中c-fos表达的变化；构建pcDNA3.1/CT-GFP-TOPO-c-fos重组质粒，鉴定正确后以Lipofectamine 2000介导，将其导入COS-7细胞，倒置荧光显微镜观察，并用Western blot方法验证其蛋白的表达。结果：模型组大鼠从体征、症状、结肠粘膜损伤情况、病理切片结果均提示已成功建立UC大鼠的模型；c-fos表达在蛋白水平上的半定量结果显示：UC模型组大鼠c-Fos蛋白的表达与正常组相比明显升高，差异具有统计学意义(P<0.01)；经治疗后西帕依溃结安干预组大鼠c-Fos蛋白的表达与UC模型组相比明显降低，差异具有统计学意义(P<0.05)；生理盐水组大鼠c-Fos蛋白的表达高于西帕依溃结安干预组，差异具有统计学意义(P<0.05)；c-fos表达在mRNA水平上的半定量结果显示组间无统计学意义。经PCR和测序鉴定表明，克隆出大鼠结肠组织c-fos的编码序列同GeneBank收录的序列一致，表明真核表达质粒的构建正确。以脂质体转染COS-7细胞后，用倒置荧光显微镜观察和Western blot检测表明，细胞可表达融合蛋白。结论：c-fos表达的变化可能与UC的发生、发展相关联；维药西帕依溃结安治疗UC的作用可能与其降低了c-fos的表达有关；成功构建并能高效转染COS-7细胞的pcDNA3.1/CT-GFP-TOPO-c-fos重组质粒，为进一步研究UC发病的敏感点及维药西帕依溃结安治疗UC的作用靶点奠定基础。

目录

论文说明：中英文缩略词对照表

声明

摘要

前言

材料与方法

1.材料

1.1实验对象

1.2主要仪器

1.3试剂

2.方法

2.1 UC大鼠动物模型的建立

2.2大鼠结肠组织中c-fos表达的变化

2.3大鼠c-fos基因真核表达载体的构建及其表达

2.4统计学处理

结果

讨论

小结

致谢

参考文献

综述：溃疡性结肠炎发病机理的研究进展

攻读硕士学位期间发表的学术论文

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