亚砷酸钠对体外培养人淋巴细胞抗氧化系统及CAT基因表达的影响

摘要

目的：研究亚砷酸钠(NaAsO2)对正常人淋巴细胞活力的影响，观察砷对抗氧化物质及抗氧化酶的作用，探讨砷对过氧化氢酶(CAT)的RNA表达的影响。 方法：不同浓度的NaAsO2(2、5、10、15、30、60μmol/L)作用于淋巴细胞24h，48h，72h，用四噻唑兰(MTT)还原法观察淋巴细胞生长情况；采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测淋巴细胞中谷胱甘肽(GSH)含量、黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶(SOD)活力、硫代巴比妥法(TBA)检测丙二醛(MDA)含量、紫外分光法检测CAT活力。NaAsO2作用淋巴细胞72h后，用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测CAT的RNA表达水平。 结果：1.与对照组相比，2、5μmol/L染毒组淋巴细胞活力增强，10μmol/L以上染毒组淋巴细胞活力降低，且存在时间-剂量交互效应(F=2.023，P＜0.05)；2.2～10μmol/L染毒组淋巴细胞GSH含量增加，GSH含量在24、48、72h明显高于对照组(P＜0.05)，SOD活力提高、MDA含量降低、CAT活力提高；与2、5gmol/L染毒组比较，15～60μmol/L染毒组淋巴细胞GSH含量降低，SOD活力降低，MDA含量增加、CAT活力降低，各染毒组在24hCAT含量差异均有统计学意义(P＜0.05)，且存在时间-剂量交互效应(F分别为12.382，4.212，3.498，2.149，P均＜0.01)；3.GSH含量和SOD活力之间存在正相关性(r=0.977，P＜0.01)，与MDA含量之间存在负相关性(r=0.956，P＜0.01)，SOD活力和MDA含量之间存在负相关性(r=0.924，P＜0.01)；4.CAT活力和GSH含量(r=0.784，P=0.000)、SOD活力(r=0.765，P=0.000)之间存在正相关性，并和MDA含量(r=0.814，P=0.000)之间存在负相关性；5.RT-PCR电泳结果可见，2～10μmol/L染毒组淋巴细胞CAT/β-actin吸光度比值与对照组比较轻微上升，15～60μmol/L染毒组淋巴细胞CAT/β-actin吸光度比值与对照组比较明显下降，且呈剂量-反应关系。 结论：15μmol/L以上NaAsO2可降低淋巴细胞内CAT基因的RNA表达水平并可抑制淋巴细胞生长，砷通过降低抗氧化物质含量、抗氧化酶活力，诱导抗氧化基因表达下调，引起抗氧化反应水平增高。CAT的诱导下降与地方性砷中毒易感性有关，可以考虑作为地方性砷中毒易感标志物。

目录

论文说明：英文缩略语表

声明

摘 要

前 言

材料与方法

1 材 料

1.1受试细胞

1.2受试药物

1.3主要仪器

1.4主要试剂

1.5主要工作液

2方 法

2.1淋巴细胞的分离

2.2淋巴细胞的计数

2.3淋巴细胞的鉴定

2.4淋巴细胞染毒分组

2.5淋巴细胞活力的检测

2.6抗氧化指标的检测

2.7 CAT活力测定及CAT基因表达的测定

3统计学处理

4质量控制

结 果

讨 论

小 结

致 谢

参考文献

综 述：慢性砷中毒的脂质过氧化机制研究进展

攻读硕士学位期间发表的学术论文