亲属间HLA单倍体与全相合非体外去T细胞外周血干细胞移植临床及免疫功能重建研究

摘要

目的：⑴研究应用清髓性预处理和个体化的按HLA位点不同的差异程度联合多少不等的免疫抑制剂进行亲属间HLA单倍体相合非体外去T细胞外周血干细胞移植（PBSCT）治疗恶性血液病，通过临床和实验室验证适合临床应用的能减少排斥和重度急性移植物抗宿主病（aGVHD）的新移植方案，并对单倍体移植后免疫功能重建进行研究；⑵前瞻性对比研究同期亲属间HLA单倍体与HLA全相合非体外去T细胞PBSCT治疗恶性血液病的移植效果，探讨HLA单倍体移植是否可以取得与HLA全相合非体外去T细胞PBSCT治疗恶性血液病相似的植入、移植物抗宿主病（GVHD）发生率、肿瘤复发率及长期无白血病生存率（LFS）；⑶前瞻性的对比研究同期HLA单倍体与HLA全相合非体外去T细胞PBSCT后两组患者T、B、NK细胞亚群的动态变化，探讨PBSCT后免疫功能重建的特点，并对发生主要并发症与未发生患者的免疫功能重建进行对比研究。
　　 方法：⑴HLA单倍体相合PBSCT治疗恶性血液病52例，患者中位数年龄38（11～47）岁，男32例，女20例，HLA1个位点不合9例，2～3个位点不合43例。恶性血液病按移植时病情分为标危型36例，高危型16例。HLA-A、B及DR位点分型均采用微量顺序特异引物聚合酶链反应（微量PCR-SSP）方法进行。预处理方案为清髓性的，主要采用阿糖胞苷（Ara-C）+马利兰（Bu）+环磷酰胺（Cy）方案，预防GVHD均以环孢素（CsA）加短程甲氨蝶呤（MTX）为基础方案，HLA1个位点不合时加用霉酚酸酯（MMF），HLA2～3个位点不合时在加用MMF基础上再联合抗胸腺细胞球蛋白（ATG）及抗CD25单克隆抗体，CsA于-1d开始使用，剂量为2.5mg·kg-1·d-1，能口服时改为5mg·kg-1·d-1，于+180d后逐渐减量，减到原剂量的2/3，到11个月后逐渐减量直到停用，MTX静脉滴注剂量为+1d15mg/m2，+3、+6、+11d剂量为10mg/m2，MMF用量为1g·d-1分2次口服，于-1d开始，如无aGVHD，于+40d减半量，+90～+100d停用；兔抗人ATG2.5mg·kg-1·d-1×4d（-4～-1d）；抗CD25单克隆抗体20mg于0天输注干细胞前及+4d各静点1次。使用粒细胞集落刺激因子（G-CSF）对供者进行PBSC动员，剂量为7～10μg·kg-1·d -1，于动员后第5及第6天用血液细胞分离机（COBE Spectra）进行PBSC单采，采集前检测供者血常规（包括白细胞计数及血涂片瑞氏染色后白细胞分类），采集后检测PBSC单个核细胞数及CD34+细胞数并将PBSC经中心静脉回输给患者；⑵同期111例恶性血液病患者异基因PBSCT（allo-PBSCT），其中单倍体相合移植患者51例，同期全相合移植患者60例。预处理方案均为清髓性，主要采用改良Bu/Cy方案和Bu/Cy方案。单倍体与全相合移植患者均以经典CsA加短程MTX作为基础方案预防GVHD，单倍体移植患者另根据HLA位点不合的程度加用MMF和（或）ATG及抗CD25单克隆抗体。患者在预处理前行鞘内注射MTX10～15mg或口服甲基环已亚硝脲（Me-CCNU）预防脑膜白血病的发生。两组患者发生aGVHD后均加用甲泼尼龙（MP）治疗，发生慢性移植物抗宿主病（cGVHD）后一般给予泼尼松加硫唑嘌呤治疗。移植物为经G-CSF动员的未进行体外去除T细胞的PBSC；⑶采用间接免疫荧光法，主要试剂为CD3、CD4、CD8、CD19、CD16、CD56一抗及二抗，首先制备单个核细胞悬液，再进行T、B、NK亚群检测。对移植前，移植后1月、3月、6月、12月及18月两组患者的T（CD3+、CD4+、CD8+）、B（CD19+）、NK（CD16+、CD56+）细胞亚群的动态变化，并进行组间比较。同时检测100名健康人的T、B、NK亚群作为对照组，与单倍体组和全相合组移植前后各时间点免疫功能变化进行比较。
　　 结论：⑴清髓性预处理方案和依HLA不合位点差异的程度联合多少不等含或不含ATG和抗CD25单克隆抗体免疫抑制剂的预防GVHD方案，移植物为经G-CSF动员的非体外去T细胞的PBSC的HLA单倍体移植方案治疗恶性血液病安全可行；⑵单倍体非体外去T细胞外周血干细胞移植造血功能重建快，供者易于接受，可多次采集，而重度aGVHD及广泛型cGVHD发生率并不高；⑶HLA单倍体与HLA全相合非体外去T细胞的PBSCT治疗恶性血液病时的植入、cGVHD发生率、复发率及长期LFS相似。单倍体移植时aGVHD高于全相合移植，但重度aGVHD发生率两组相似；⑷单倍体与全相合非体外去T细胞外周血干细胞移植造血功能重建快，而重度aGVHD及广泛型cGVHD发生率均不高；⑸与正常人对照组对比，HLA单倍体与全相合非体外去T细胞PBSCT后患者免疫功能均于移植1年后同期恢复正常，组间比较移植后1年免疫功能也均无统计学差异；⑹HLA单倍体移植后+6月内免疫损伤较HLA全相合明显，免疫重建迟于HLA全相合移植；⑺HLA单倍体与全相合非体外去T细胞PBSCT后T、B、NK亚群变化以T细胞最为明显并最具临床及实验室意义。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：中英文缩略词对照表

声明

前 言

全文总结

致 谢

参考文献

综述：HLA单倍体非体外去T细胞造血干细胞移植

个 人 简 历

攻读博士学位期间发表的相关学术论文