乌鲁木齐市维吾尔族不同龋敏感儿童变形链球菌产酸、耐酸性及耐酸毒力因子遗传多态性研究

摘要

目的：研究乌鲁木齐市维吾尔族不同龋敏感儿童变形链球菌不同状态下产酸、耐酸性的差异及F-ATPase遗传多态性与细菌耐酸能力之间的相关性。
　　方法:分离自维吾尔族不同龋易感儿童口腔中50株变形链球菌临床菌株为研究对象，含5％蔗糖不同初始pH值得培养基中厌氧培养，采用精密PH计检测变形链球菌生长前后培养基pH值的变化（△PH值），紫外分光光度计检测培养后菌悬液浓度，比较维吾尔族不同龋敏感儿童变形链球菌菌株在不同生长条件下的产酸能力及生长情况。前一实验筛选16株高耐酸、17株低耐酸菌株，特异引物从细菌组DNA扩增uncD、uncEBF，采用限制性内切酶长度多态性分析（RFLP）和核酸测序比较突变位点。
　　结果:1）乌鲁木齐市维吾尔族不同龋敏感儿童变形链球菌临床分离株在不同初始pH值条件下的产酸能力和生长情况，结果示PH为5.5、5.0时，高龋组和无龋组细菌产酸能力具有显著性的差异（P＜0.05），高龋组和无龋组细菌的生长能力不同，无统计学意义（P＞0.05）。2）uncD经限制性内切酶ALuⅠ-RFLP产生A、B、C三种基因型，不同基因型在不同耐酸力菌株的构成比的比较，其分布具有差异，差异无统计学意义（P=0.236，P＞0.05）；内切酶HinfⅠ-RFLP产生的D、E、F三种基因型，不同基因型在高低耐酸菌株的构成比比较，分布具有统计学意义（P=0.012，P＜0.05），测序证实了导致多态性出现的突变位点。3） uncEBF行不同限制性内切酶RFLP产生不同的基因型，测序证实了导致多态出现的基因变异位点；其中内切酶AluⅠ产生的A、B基因型在不同耐酸力菌株的分布不同（P＜0.05）；不同基因型在维吾尔族不同龋敏感儿童分布不同（P＜0.05）。
　　结论:乌鲁木齐市维吾尔族高龋儿童口腔中变形链球菌临床分离株具有高的致龋性；变链菌耐酸因子F-ATPase的uncD、uncEBF基因具有明显的遗传多态性，且基因的多态性与菌株的耐酸力和龋敏感性具有相关性。

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前言

资料与方法

1 研究对象

1.1 产酸、耐酸实验菌株及细菌培养

1.2 耐酸基因实验菌株和培养基

2 内容与方法

2.1 实验材料和仪器

2.2 实验方法

3 质量控制

4 统计方法

结果

1 不同状态下变链菌产酸、耐酸能力的比较

1.1 浮游状态下不同龋敏感的变形链球菌菌株产酸能力的比较

1.2 浮游状态下不同变形链球菌菌株耐酸能力的比较

1.3 在浮游状态下pH值4.0～4.5时细菌的生长情况

1.4 生物膜状态下不同变形链球菌菌株产酸能力的比较

1.5 扫描电镜观察不同PH变形链球菌生物膜结构

2 uncD、uncEBF基因分析结果

2.1 uncD、uncEBF基因PCR扩增结果

2.2 变链菌F-ATPase亚基uncD、uncEBF基因的RFLP分析

2.3 PCR产物测序分析

讨论

1 变形链球菌不同状态下产酸、耐酸的实验

1.1 变形链球菌在不同状态下产酸的能力

1.2 变链菌浮游状态下耐酸能力比较

2 变链菌耐酸因子F-ATPase基因遗传多态性

2.1 uncD基因

2.2 uncEBF基因

小结

致谢

参考文献

综述

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