乌鲁木齐市维吾尔族不同龋敏感儿童变形链球菌临床分离株黏附、产糖及相关基因多态性研究

摘要

目的：通过比较乌鲁木齐市维吾尔族不同龋敏感儿童变形链球菌临床分离株黏附及合成胞外多糖能力的差异，以及其黏附相关基因 spaP-a，spaP-c，spaP-pv和糖代谢相关基因gtfB，gtfC，Srv+遗传多态性的比较，探讨高龋和无龋儿童致龋能力差异的相关机制。
　　方法：1.利用酶标仪检测高龋组(dmft≥5)和无龋组(dmft=0)变形链球菌在牛心脑浸粉液体培养基中对玻壁的黏附情况。2.分别对高黏附组和低黏附组变链菌表面蛋白A区、PV区、C末端编码基因spaP-a，spaP-c，spaP-pv经限制性内切酶HaeⅢ、AluⅠ酶切分型，利用PCR-RFLP比较各基因型在两组细菌中的分布情况。3.采用蒽酮法测定高龋组与无龋组变链菌在生物膜状态下合成胞外多糖的量。4.对合成水不溶性葡聚糖较高组和较低组变链菌葡萄糖基转移酶编码基因gtfB、gtfC，以及表面蛋白可变区V区编码基因SrV+，经限制性内切酶BsrⅠ、SsPⅠ、DdeⅠ进行酶切分型，利用PCR-RFLP比较各基因型在两组细菌中的分布情况。
　　结果：1.高龋组变链菌玻壁黏附比率平均为(33.92?8.79)％，高于无龋组(27.53?7.45)%，差异有统计学意义(P＜0.05)。2. spaP-a经HaeⅢ酶切后出现两种基因型，且在不同黏附力菌株间的分布不同(P＜0.05)。spaP-c，spaP-pv经AluⅠ酶切后均表现为同一基因型。3.高龋组合成水不溶性葡聚糖量平均为0.3333?0.0479mg/ml，高于无龋组0.2356?0.0507mg/ml，差异有统计学意义(P＜0.05)；高龋及无龋组变链菌临床菌株生物膜状态下合成水不溶性葡聚糖量为0.3311?0.0576 mg/ml高于水溶性葡聚糖量0.2578?0.0632mg/ml，差异有统计学意义(P＜0.05)。4. gtfB、gtfC经BsrⅠ和SsPⅠ酶切后分别表现出三种和两种基因型，gtfB在WIG合成量较高和较低的菌株中分布不同(P＜0.05)；SrV+经DdeⅠ后出现四种基因型，且四种基因型在两组菌株的构成情况不同(P＜0.05)。测序证实spaP-a、gtfB、SrV+基因的特异性碱基突变引起酶切位点改变而产生基因多态性。
　　结论：维吾尔族不同龋敏感儿童变链菌临床分离株黏附及合成胞外多糖能力不同，spaP-a、gtfB、SrV+表现出的遗传多态性可能是导致两组变链菌黏附能力与合成胞外多糖能力差异的原因之一。为进一步研究维吾尔族不同龋敏感儿童致龋性差异的机制奠定基础。

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英文摘要

前言

研究内容与方法

1 材料和仪器

2 内容与方法

3 质量控制

4 统计分析方法

附技术路线图

结果

1 变链菌复苏及传代

2 高龋及无龋组变链菌临床分离株玻壁黏附比(%)

3 变链菌不同黏附能力菌株表面蛋白遗传多态性分析

4 高龋、无龋组变链菌临床株生物膜状态下合成胞外多糖能力的比较分析

5 变链菌不同 WIG 合成能力菌株 gtfB、gtfC、SrV+基因遗传多态性的分析

讨论

1 变形链球菌黏附形成生物膜的特点

2 变链菌合成胞外多糖的致龋特点

3 基因多态性研究

4 PCR-RFLP技术

5 实验结果的分析

6 展望

小结

致谢

参考文献

综述： 抑制变形链球菌黏附作用的研究新进展

攻读硕士学位期间发表的学术论文

新疆医科大学硕士研究生学位论文导师评阅表