生物碱类胃癌多药耐药逆转剂的筛选及机制研究

摘要

目的：多药耐药性（MDR）是导致肿瘤化疗失败的主要原因之一，从中药单体、复方中筛选高效、低毒的肿瘤耐药逆转剂是目前抗肿瘤药物研究的新策略。本研究以人胃癌亲本细胞系SGC7901和耐药细胞系SGC7901/VCR为细胞模型，骆驼蓬碱（HM）、去氢骆驼蓬碱（HMI）、贝母素甲（PM）、贝母素乙（PMI）和氧化苦参碱（OMT）等5种生物碱类药物为研究对象，体外筛选MDR逆转剂，研究其耐药逆转活性及作用机制，为临床治疗多药耐药性胃癌提供逆转策略。
　　方法：
　　（1）MTT法检测HM、HMI、PM、PMI和OMT的细胞毒性及耐药逆转效果；
　　（2）流式细胞仪检测筛选出的贝母素乙对肿瘤细胞内阿霉素（ADR）蓄积的影响；
　　（3）Western blot法检测贝母素乙干预后P-糖蛋白（P-gp）的表达变化；
　　（4）流式细胞仪检测贝母素乙诱导SGC7901/VCR细胞凋亡的百分率变化；
　　（5） Western blot法检测贝母素乙诱导细胞凋亡时 Bcl-2、Bax、Caspase-3和Cleaved caspase-3蛋白的表达差异；
　　（6）细胞免疫荧光法检测贝母素乙诱导耐药细胞凋亡的过程中Cleaved caspase-3蛋白表达差异。
　　结果：
　　（1）HM、HMI、PM、PMI和OMT均能不同程度的抑制亲本细胞SGC7901和耐药细胞SGC7901/VCR的增殖作用，非毒性剂量的贝母素乙能够显著提高 SGC7901/VCR细胞对化疗药物长春新碱（VCR）、阿霉素、5-氟尿嘧啶（5-Fu）、顺铂（CDDP）敏感性。
　　（2）非毒性剂量的贝母素乙能够显著提高 SGC7901/VCR细胞内 ADR的蓄积，降低P-gp的表达。
　　（3）贝母素乙联合5-Fu可诱导耐药细胞凋亡：
　　①流式细胞仪结果显示：对照组单独使用贝母素乙或5-Fu时，细胞凋亡百分率小于15％，实验组联合用药时，细胞凋亡百分率分别为：17.8%、29.5%、44.5%；
　　②Western blot法检测结果显示：实验组和对照组的Bcl-2和Bax蛋白表达差异无统计学意义，而Caspase-3和Cleaved caspase-3蛋白表达呈剂量依赖性和时间依赖性增加。
　　③细胞免疫荧光法检测证明了贝母素乙联合5-Fu可诱导耐药细胞凋亡，其凋亡机制与激活Caspase-3产生Cleaved caspase-3剪切体的相关。
　　结论：贝母素乙能够作为胃癌多药耐药逆转剂逆转MDR，其逆转机制与下调P-gp蛋白表达和激活Caspase通路诱导耐药细胞凋亡相关。

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前言

研究内容

1 生物碱类化合物逆转胃癌多药耐药的活性筛选

1.1引言

1.2 材料与仪器

1.3实验内容

1.4 结果

1.5 讨论

2 贝母素乙逆转SGC7901/VCR细胞株介导的药物外排机制研究

2.1 引言

2.2 材料与仪器

2.3 实验内容

2.4结果

2.5 讨论

3 贝母素乙诱导SGC7901/VCR细胞凋亡机制的研究

3.1 引言

3.2 材料与仪器

3.3 实验内容

3.4 结果

3.5 讨论

小结

致谢

参考文献