增龄性房颤与超极化激活环核苷酸门控通道重塑的分子生物学研究

摘要

目的：
　　超极化激活环核苷酸门控通道（HCN通道）是4期自动去极化的重要离子通道，其在窦房结的表达下降，会导致病态窦房结综合征，同时减弱对异位起搏点抑制作用；在心房、肺静脉表达上升，可导致异位快速型心律失常的发生。增龄可使心房颤动患病率增高，其机制与窦房结功能下降及异位兴奋灶自律性增高有关。目前，关于增龄过程中HCN通道在窦房结和心房、肺静脉之间的表达改变与增龄性房颤的关系研究较少。因此，研究不同年龄、不同节律的心房、肺静脉、窦房结的HCN通道的表达情况，有助于进一步明确增龄性房颤的分子生物学机制，为房颤的机制研究和治疗提供理论依据和新的思路。
　　本研究课题包括：
　　（1）比较成年窦性犬和老龄窦性犬、老龄房颤犬的电生理特性，窦房结、左右心房、肺静脉的HCN2、HCN4通道的mRNA和蛋白表达差异。
　　（2）比较行心外科手术的成年窦性患者和老龄窦性患者、老龄房颤患者右心房HCN2、HCN4通道mRNA和蛋白的表情差异，以及microRNA-1，133的表达差异。
　　（3）采用HCN通道特异性抑制剂伊伐布雷定对老龄房颤犬进行药物干预治疗，比较房颤诱发率、房颤持续时间以及HCN2、HCN4通道的mRNA表达水平差异。
　　方法：
　　本课题第一部分：30只比格犬根据年龄和节律分为成年窦性组、老龄窦性组、老龄房颤组，每组10只，其中，老龄房颤犬植入起搏器，行心房快速起搏4周（600次/分），测量三组有效不应期、有效不应期离散度、有效不应期频率自适应性、校正窦房结恢复时间等指标。采用半定量及实时荧光定量聚合酶反应和蛋白免疫印迹技术，比较窦房结、左右心房、肺静脉的HCN2、HCN4的mRNA和蛋白表达水平差异。
　　课题第二部分：采集心外科须行心外手术的患者右心耳标本，采用半定量及实时荧光定量聚合酶反应和蛋白免疫印迹技术比较mRNA和蛋白表达水平差异，同时采用实时荧光定量聚合酶反应比较microRNA-1，133的表达水平差异。
　　课题第三部分：给予植入起搏器的老龄犬行药物干预，一组喂服伊伐布雷定，一组为正常喂养，不添加药物干预，4周后2组行房颤诱发，观察房颤诱发率和诱发后房颤持续时间，同时采用实时荧光定量聚合酶反应检测窦房结、左右心房、肺静脉的HCN2、HCN4通道mRAN和蛋白表达情况。
　　结果：
　　（1）老龄窦性犬相比成年窦性犬，HCN2、HCN4通道mRNA在窦房结表达下降，而左右心房、肺静脉出现表达增强；老龄房颤犬相比老龄窦性犬，HCN2、HCN4通道在窦房结表达进一步下降，在左右心房表达进一步增强，而在肺静脉，HCN2表达无差异，HCN4表达增强。
　　（2）老龄窦性患者相比成年窦性患者，右心耳HCN2、HCN4通道mRAN和蛋白表达增强，microRNA-1，133表达下降；老龄房颤患者相比老龄窦性患者，HCN2、HCN4通道表达进一步增强，microRNA-1，133表达进一步下降。
　　（3）伊伐布雷定药物干预组相比对照组，房颤诱发率无差异，但诱发后房颤持续时间明显下降，HCN2、HCN4通道mRNA在左右心房表达无差异。
　　结论：
　　（1）增龄和房颤使比格犬窦房结HCN2、HCN4通道表达下降，左右心房、肺静脉表达增强。提示 HCN通道可能是增龄性房颤的发病机制之一；
　　（2）增龄和房颤使人右心房HCN2、HCN4表达增强，microRNA-1，133表达下降；
　　（3）伊伐布雷定能缩短房颤持续时间，可能是房颤预防和治疗的有效药物。因此，上述研究表明，增龄引起HCN通道在窦房结和左右心房、肺静脉出现表达反转，这种现象有利于增龄性房颤的发生和维持。伊伐布雷定作为HCN通道的特异性抑制剂，可能是房颤预防、治疗的有效药物。

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前言

第一部分增龄慢性房颤犬与超极化激活环核苷酸门控通道重塑的分子生物学研究

1 研究内容和方法

2 结果

3 讨论

4 小结

第二部分人右心耳超极化激活环核苷酸门控通道在增龄及房颤中的表达差异

1 标本的收集

2 结果

3 讨论

4 小结

第三部分伊伐布雷定对老龄慢性房颤犬模型的影响

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

4 小结

结论

致谢

参考文献

综述

攻读博士学位期间获得的学术成果

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