GGCX在新疆地区人群中的基因多态性及其对华法林剂量的影响

摘要

目的：（1）了解γ-谷氨酰基羧化酶（Gamma-glutamyl carboxylase，GGCX）基因多态位点在新疆地区哈萨克族、汉族人群中分布、特点及比较两个民族之间的差异；（2）探讨GGCX rs6751560多态性与新疆地区哈萨克族人群房颤的关系；3）分析新疆地区房颤人群GGCX rs259251、rs762684、rs11676382和rs6751560多态性对华法林剂量的影响。
　　方法：（1）标准酚-氯仿法提取新疆地区哈萨克、汉族各305例健康人外周血基因组 DNA，应用多聚酶链反应-限制性内切酶长度片段多态性（PCR-RFLP）技术对GGCX的两个单核苷酸位点（分别为：rs11676382，rs6751560）进行基因多态性监测，计算其基因型，并在两个民族之间基因多态性分布进行比较。（2）采用直接测序的方法对 GGCX基因 rs6751560位点，采用聚合酶链反应－限制性片段长度多态性方法，对305例房颤患者与385例健康对照者 GGCX基因rs6751560多态性进行监测。（3）采用聚合酶链反应－限制性片段长度多态性和直接测序的方法，对269例服用华法林的房颤患者的rs259251、rs762684、rs11676382和rs6751560位点进行检测，统计分析不同基因型对华法林剂量的影响。
　　结果：（1） rs11676382基因型CC、CG和GG在哈萨克族人群中分别有66例、233例和6例，各占21.64％、76.39%和1.97%，C和G等位基因的频率分别为59.84%和83.50%，在汉族人群中分别有209例、93例和4例，各占68.30%、30.39%和1.31%，C和G等位基因的频率分别为40.16%和16.50%；rs6751560基因型在哈萨克族人群中AA、AG和GG分别有2例、11例和292例，各占0.66%、3.61%和95.74%，A和G等位基因的频率分别为2.46%和97.54%，在汉族人群中AA、AG和GG分别有4例、3例和298例，各占1.31%、0.98%和97.70%，A和G等位基因的频率分别为1.80%和98.20%；rs11676382位点基因型比较总?2=134.88，P＜0.01，进一步于显性模型CC与CG+GG，隐性模型GG与CC+CG，附加模型CG与CC+GG的比较，显性模型?2=134.4，附加模型?2=129.88，P＜0.01（差异有统计学意义），隐性模型2?=0.42，P=0.54，差异无统计学意义；等位基因C与G比较，?2=84.26，P＜0.01，差异有统计学意义。rs6751560基因型及等位基因差异均无统计学意义；（2）房颤组突变型GG及杂合型AG的频率（44.9%，44.6%）高于对照组，2组比较差异有统计学意义（?2=126.36，P＜0.01）。房颤组的G等位基因频率（67.2%）也高于对照组，2组之间差异有统计学意义（?2=144.19，P＜0.01）。进一步行三个模型的比较，2?值和P值分别为，显性模型139.35，P＜0.01，隐性模型81.13，P＜0.01，附加模型0.75，P＞0.05。说明基因型AA是房颤的保护因素，GG是危险因素，而AG是对房颤作用不明显。在调整了年龄、性别、吸烟、饮酒、身高、体重、BMI等混杂因素后GGCX基因rs6751560位点多态性、高血压、冠心病、糖尿病是哈萨克族人群房颤的危险因素（均P＜0.01，OR值分别4.24、11.83、3.59、4.90，95%CI分别是2.63-6.83、6.92-20.23、2.29-5.64、3.07-7.79）；3）rs2592551基因多态性检测结果为野生纯合子CC型136例（50.56%），杂合子CT型115例（42.75%），突变纯合子TT型18例（6.69%）；等位基因频率C71.93%，T28.07%。CC型患者华法林的平均稳定剂量为（2.86±0.61）mg/d，CT型为（3.59±0.93）mg/d，TT型为（4.06±0.88）mg/d；rs762684基因多态性检测结果为野生纯合子CC型129例（47.96%），杂合子CT型110例（40.89%），突变纯合子TT型30例（11.15%）；等位基因频率C68.40%，T31.60%。CC型患者华法林的平均稳定剂量为（2.77±0.67） mg/d，CT型为（3.26±0.80）mg/d，TT型为（3.65±1.0）mg/d，以上两个位点各组间华法林剂量比较，CC和TT，CC和CT间差异有统计学意义（P＜0.05），而TT和CT间差异无统计学意义；rs1676382基因多态性检测结果为野生纯合子 CC型115例（42.75%），杂合子CG型119例（47.96%），突变纯合子GG型25例（9.29%）；等位基因频率C66.73%，G33.27%。CC型患者华法林的平均稳定剂量为（2.55±0.42）mg/d，CG型为（3.12±0.71）mg/d，GG型为（3.92±0.86）mg/d；本位点各组间华法林剂量比较，CC和GG，CC和CG间差异有统计学意义（P＜0.05），而CG和GG间差异无统计学意义。rs6751560基因多态性检测结果为野生纯合子AA型101例（37.55%），杂合子AG型127例（47.21%），突变纯合子GG型41例（15.24%）；等位基因频率A61.15%，G38.85%。AA型患者华法林的平均稳定剂量为（2.38±0.61）mg/d，AG型为（3.41±0.98）mg/d，GG型为（4.02±0.89） mg/d；本位点各组间华法林剂量比较，AA和GG，AA和AG间差异有统计学意义（P＜0.05），而AG和GG间差异无统计学意义。
　　结论：（1）新疆地区哈萨克族与汉族rs11676382位点，两个民族均CC和CG基因型比较常见，C等位基因出现的频率比G等位基因出现的频率高；CC基因型是保护因素，而CG基因型是危险因素，GG基因型既不是保护因素，又不是危险因素。rs6751560位点两个民族中GG基因型常见，A和G等位基因出现的频率相等；（2）在新疆哈萨克族人群中，GGCX基因（rs6751560位点）多态性与房颤具有相关性，GG基因型可能增加哈萨克族人群房颤发生的风险；（3）新疆地区房颤人群中，GGCX基因 rs259251、rs762684、rs11676382和rs6751560位点分别 CT和TT基因型所需华法林剂量均较明显高于CC基因型；GG基因型所需华法林剂量均较明显高于CC基因型；GG基因型所需华法林剂量均较明显高于 AA基因型，故 rs2592551、rs762684、rs11676382和rs6751560多态性可能是影响房颤患者华法林剂量的因素之一。

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前言

1 华法林维持剂量的民族差异

2 华法林和基因多态性

第一部分新疆地区哈萨克族、汉族人群中GGCX基因多态性分析

1 研究内容与方法

2 结果

3 讨论

4 小结

第二部分GGCX基因SNP位点rs6751560与新疆地区哈萨克族人群房颤的相关性研究

1 研究内容与方法

2 结果

3 讨论

4 小结

第三部分GGCX基因多态性与新疆地区房颤人群华法林剂量的相关性研究

1 研究内容与方法

2 结果

3 讨论

4 小结

结论

致谢

参考文献

综述

攻读博士学位期间获得的学术成果

个人简历

导师评阅表