利用基因芯片技术筛选食管癌细胞侵袭转移相关分子靶标

摘要

目的：应用基因芯片技术筛选食管癌侵袭转移相关基因，初步了解食管鳞癌侵袭转移相关机制。
　　方法：利用Transwell侵袭小室技术建立具有不同侵袭转移潜能的人食管鳞癌Eca109和Eca109-T4细胞株；分别提取Eca109和Eca109-T4的总RNA，用转录Cy5和Cy3荧光标记成cDNA探针，再与Affymetrix基因芯片杂交，杂交信号用Genechip?Scanner3000扫描，SAM3.0、Cluster3.0软件分析和处理数据；运用实时荧光定量PCR（real-time quantitative PCR，qRT-PCR）技术对CXCR7、SDC2、HSP90α1、TNFRSF10D基因进行验证；数据采用SPSS17.0软件进行统计分析。
　　结果：筛选出Eca109和Eca109-T4差异基因有80个：与母系比较，在Eca109-T4中上调表达的基因有34个，下调表达的基因有46个。其中，经实时荧光定量 PCR（qRT-PCR）验证：CXCR7在Eca109-T4中的mRNA表达量（9.86±1.38）显著高于 Eca109（6.04±1.88，P﹤0.05），SDC2在 Eca109-T4中的mRNA表达量（0.07±0.0067）显著高于Eca109（0.04±0.0037，P﹤0.05），HSP90α1在Eca109-T4中的mRNA表达量（0.18±0.0460）显著高于 Eca109（0.05±0.0098，P﹤0.05），TNFRSF10D在Eca109-T4中的mRNA表达量（0.009±0.0006）与Eca109（0.005±0.0040，P﹥0.05）无明显差异。
　　结论：基因芯片技术是一个高效的筛选与食管癌侵袭和转移相关基因的方法，CXCR7、SDC2、HSP90α1等基因可能与食管癌侵袭转移机制相关。

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前言

研究内容与方法

1 研究对象

1.1 细胞株来源

1.2 引物设计与合成

1.3 实验中用到的主要试剂

1.4 实验中用到的相关溶液的配制

1.5 主要仪器

2 内容与方法

2.1 细胞培养

2.2 体内、体外实验验证筛选的食管癌细胞株的不同侵袭转移潜能

2.3 基因芯片技术筛选食管癌侵袭转移相关差异基因

2.4 实时荧光定量PCR技术验证转移相关差异基因

2.5 统计学分析

结果

1 高侵袭力食管癌Eca109-T4细胞株的建立

2 两系细胞生物特性的体内、体外检测比较

2.1细胞形态学观察、MTT法测生长曲线、细胞划痕实验

2.2裸鼠成瘤实验

3 基因芯片筛选差异基因

4 实时荧光定量PCR结果

讨论

小结

致谢

参考文献

综述

攻读硕士学位期间发表的学术论文

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