IL-6/STAT3信号通路在多房棘球绦虫感染小鼠肝切除的变化及其对肝再生的影响

摘要

目的:研究以 IL-6/STAT3信号通路为中心的细胞因子在多房棘球绦虫感染小鼠肝脏切除的变化及对肝再生的影响。
　　方法:采用皮下穿刺接种泡球蚴混悬液，建立泡球蚴C57小鼠模型50只，对照组为正常C57小鼠50只。待感染进入慢性期后，实验组与对照组各随机取8只小鼠为基线组，不做手术处理。接种3个月后对各组小鼠进行2/3肝脏切除术，分别于术后第1、2、4、7天处死小鼠，取肝组织及外周血进行分析，采用ELISA法进行血浆IL-6的检测，采用Taqman Real-time PCR进行肝脏IL-6 mRNA的检测，采用Western Blot进行STAT3蛋白的检测，以及采用免疫组化进行BrdU、CD31的检测。组间比较采用U检验。
　　结果.实验组和对照组外周血ALT、AST浓度在术后第1天时明显升高，后逐渐下降至正常水平，但术后各天两组间比较差异均无统计学意义。实验组和对照组外周血IL-6在基线组以及术后第1、2、4、7天的表达量分别为（6.31±0.366、5.74±0.053），（6.14±0.146、8.30±1.799），（5.93±0.144、6.36±1.148），（5.77±0.064、5.88±0.089），（6.02±0.400、5.93±0.042）.且基线组组间及术后第一天组组间比较，差异均具有统计学意义（Ubase=7.000，Pbase=0.025），（U1=3.000，P1=0.004）。而其余几天组间比较，差异均无统计学意义。实验组和对照组肝脏组织IL-6 mRNA在基线组以及术后第1、2、4、7天的表达量分别为（13.33±2.133、14.08±0.914），（12.86±2.661、13.30±9.093），（15.246±3.163、15.867±0.907），（15.608±0.977、11.719±2.335），（14.004±2.567、16.079±0.452），且术后第四天组和第七天组组间比较，差异具有统计学意义（U4=0.000，P4=0.002），（U7=5.000，P7=0.013）。其余几天组间比较，差异均无统计学意义。实验组和对照组肝脏组织STAT3在基线组以及术后第1、2、4、7天的表达量分别为（0.497±0.002、0.558±0.000），（0.271±0.007、0.340±0.006），（0.127±0.012、0.212±0.072），（0.183±0.018、0.056±0.015），（0.210±0.037、0.116±0.040），且术后第二天组、第四天组和第七天组组内比较，差异具有统计学意义（U2=0.000，P2=0.004），（U4=0.000，P4=0.004），（U7=2.000，P7=0.010）其余几天组内比较，差异均无统计学意义。实验组和对照组BrdU在术后第1、2、4、7天的表达量分别为（1.67±0.745、2.33±0.943），（9.17±1.344、22.50±2.500），（14.33±1.491、8.17±1.572），（3.67±0.933、2.33±0.943）。且术后第二天组、第四天组组内比较，差异具有统计学意义（U2=0.000，P2=0.004），（U4=0.000，P4=0.004）。实验组和对照组CD31在术后第1、2、4、7天均无明显表达。
　　结论.:E.m.感染可能会使肝切除术后的肝再生能力的启动及达到峰值的时间具有一定的延迟作用。

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前言

研究内容与方法

1 实验动物

2 实验材料

3 动物模型建立

4 小鼠外周血标本的采集

5 小鼠外周血血浆ALT、AST的检测

6 ELISA检测小鼠外周血IL-6

7 小鼠肝脏标本的采集

8 实时荧光定量PCR（RT-PCR）检测肝脏组织IL-6基因的表达

9蛋白印迹法（Western Blot）检测肝脏组织STAT3蛋白浓度

10 病理学HE染色以及免疫组织化学技术（IHC）检测肝脏组织BrdU、CD31的表达

11 统计学方法

12 技术路线

结果

1 C57小鼠皮下接种泡球蚴的成功率

2 E.m.感染组与正常组C57小鼠2/3肝切除术术后肝脏一般情况的对比

3 2/3肝切除术后1、2、4、7天时E.m.感染小鼠与正常小鼠外周血ALT、AST浓度的差异

4 2/3肝切除术后1、2、4、7天时E.m.感染小鼠与正常小鼠外周血IL-6表达量的差异

5 2/3肝切除术后1、2、4、7天时E.m.感染小鼠与正常小鼠肝脏IL-6 mRNA表达量的差异

6 2/3 肝切除术后 1、2、4、7 天时 E.m.感染小鼠与正常小鼠肝脏STAT3蛋白表达量的差异

7 2/3肝切除术后1、2、4、7天时E.m.感染小鼠与正常小鼠肝脏BrdU表达情况的差异

8 2/3肝切除术后1、2、4、7天时E.m.感染小鼠与正常小鼠肝脏CD31表达情况的差异

讨论

1 C57小鼠的选择、皮下接种泡球蚴和进行2/3肝切除术的意义

2 两组小鼠在2/3肝切除术后不同时间段内肝脏组织的HE染色病理切片变化

3 两组小鼠2/3肝切除术后不同时间段内外周血血浆ALT、AST浓度的变化

4 两组小鼠2/3肝切除术后不同时间段内外周血和肝脏IL-6表达情况的变化

5 两组小鼠2/3肝切除术后不同时间段内肝脏STAT3表达情况的变化

6 两组小鼠2/3肝切除术后不同时间段内肝脏 BrdU表达情况的变化

7 两组小鼠2/3肝切除术后不同时间段内肝脏CD31的表达情况

小结

致谢

参考文献

综述:肝脏再生研究进展——组织损伤应答的模型

攻读硕士学位期间发表的学术论文

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