SMO基因siRNA慢病毒表达载体的构建及其对胰腺癌细胞SMO基因表达的影响

摘要

目的：构建携带SMO靶向siRNA慢病毒表达载体，并证实其对胰腺癌细胞中SMO基因表达的抑制作用。
　　方法：设计并合成3条SMO基因靶向siRNA片段，利用基因重组技术构建携带此3条片段的慢病毒表达载体并测定其滴度，构建好的慢病毒表达载体转染人胰腺癌细胞株SW1990后，采用RT-PCR法检测SMO基因的表达以筛选出效果最佳的干扰表达载体，并以此载体转染SW1990细胞后采用Western blot法检测SMO蛋白表达。
　　结果：基因测序与酶切电泳结果提示成功合成SMO靶向siRNA片段且其正确插入慢病毒表达载体，无碱基缺失错排与突变，测定病毒滴度分别为5.31×108TU/ML，1.49×109TU/ML及8.50×108TU/ML，经转染SW1990细胞后，测定对SMO基因表达的抑制率分别为86.00％，74.85%及19.22%，效果最优的干扰表达载体转染SW1990细胞后对SMO蛋白表达的抑制率>80%。
　　结论：成功构建携带SMO基因靶向siRNA的慢病毒表达载体，且该载体可有效抑制胰腺癌细胞中SMO基因的表达，为进一步的研究提供了良好的实验工具。

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中文摘要

英文摘要

前言

研究内容与方法

1 研究内容

2 实验材料

3 实验方法

4 质量控制

5 统计分析

结果

1 SMO siRNA的设计与合成

2 携带SMO siRNA基因片段慢病毒表达载体的构建

3 慢病毒包装

4慢病毒滴度测定

5 携带SMO siRNA慢病毒表达载体的筛选

6 携带SMO siRNA慢病毒表达载体对SW1990细胞SMO蛋白表达的影响

讨论

1慢病毒载体

2. siRNA在肿瘤研究中的应用

3 Hedgehog信号通路与胰腺癌

4 Smoothened基因与胰腺癌

小结

致谢

参考文献

综述:胰腺癌细胞中Hh信号通路主要成员与Cx43的表达及其调控机制的研究

攻读硕士学位期间发表的学术论文

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