大蒜含硫化合物药动学及与H2S作用的相关性研究

摘要

目的：通过研究大蒜含硫化合物，包括蒜氨酸(alliin)、大蒜辣素(allicin)、一硫二丙烯(DAS)、二硫二丙烯(DADS)、三硫二丙烯(DATS)在大鼠血液中的代谢、分布及药代动力学，确定其代谢产物及有无H2S产生，并比较各大蒜含硫化合物在大鼠血液中代谢产生的H2S的量，进一步阐明大蒜含硫化合物在体内的作用是经H2S介导的。
　　方法：采用邻苯二甲醛(o-phthalaldehyde，OPA)-叔丁基硫醇柱前衍生高效液相荧光法，结合清醒动物采血系统，研究蒜氨酸经颈静脉注射后在清醒大鼠体内的药代动力学；建立HPLC-亚甲蓝法，将蒜氨酸及系列浓度大蒜辣素、DAS、DADS、DATS，分别加入大鼠血细胞中，37℃孵育10min后，检测各大蒜含硫化合物能否代谢为H2S，并比较产生的H2S的量；建立生物样品中H2S含量测定的UPLC-MS/MS法，大蒜辣素经小鼠尾静脉注射后，不同时间点取血液及组织，通过测定各时间点血浆及组织中H2S的含量，研究大蒜辣素在小鼠的药代动力学及其在小鼠组织中的分布情况。
　　结果：1.大鼠以蒜氨酸50mg/kg颈静脉注射给药后，血浆中蒜氨酸的主要药动学参数为K：0.02min-1，T1/2：34.62min，Cmax：96.51μg/mL，Tmax：5.00min，AUC(0-120min)：4004.63min·μg/mL，AUC(0-∞)：4347.93min·μg/mL，Vd：615.35mL/kg，CL：12.60mL/min/kg。2.HPLC-亚甲蓝法用于血液中H2S的测定专属性较好，H2S的线性范围为0.8~80μmol/L，定量限为0.8μmol/L。将大蒜含硫化合物加入大鼠血细胞中孵育10min后，除蒜氨酸外均可产生H2S。产生H2S效率依次为：DATS＞DADS=大蒜辣素＞DAS。3.UPLC-MS/MS法较HPLC-亚甲蓝法灵敏度更高，可检测到血液中内源性H2S，H2S的线性范围为0.15~9.60μmol/L，定量限为0.15μmol/L。预实验时大蒜辣素经小鼠尾静脉注射后，血浆样品经质谱初步检测，大蒜辣素、DAS、DADS和DATS均未检测到，但衍生化后可检测到H2S，因此以H2S为指标进行大蒜辣素药代动力学及组织分布研究。大蒜辣素代谢产物H2S的主要药动学参数为K：0.086min-1，T1/2：8.926min，Cmax：0.968μmol/L，Tmax：15.000min，AUC(0-45min)：375.617min·μg/mL，AUC(0-∞)：376.233min·μg/mL，Vd：3808.050mL/kg，CL：320.561mL/min/kg。给药后，小鼠血浆和各组织中H2S的含量均有增加，15min后达血药浓度峰值，20min后各组织H2S含量也达最高值，H2S含量依次为：肾脏＞脑＞脾＞肝脏＞肺＞心，肾脏H2S增加了367.35％。
　　结论：本研究获得的蒜氨酸的药动学参数可用于后续蒜氨酸体内分布、代谢等动力学及生物利用度的研究。大蒜含硫化合物体外实验结果表明蒜氨酸在血液中不能代谢成H2S，而蒜氨酸与蒜酶反应后产生的大蒜辣素及其进一步降解产生的DAS、DADS和DATS可在血液中代谢产生H2S。体内实验进一步证实H2S是大蒜辣素代谢产物，推测大蒜辣素等含硫化合物通过H2S发挥生物活性作用，大蒜含硫化合物有望成为H2S供体的天然含硫化合物。

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前言

研究内容

1 蒜氨酸在清醒大鼠体内的药动学研究

1.1 仪器、药品与试剂

1.2 方法与结果

1.3 讨论

2 大蒜含硫化合物在大鼠血液中代谢H2S的比较

2.1 仪器、药品与试剂

2.2 方法与结果

2.3 讨论

3 以H2S为指标UPLC-MS/MS研究大蒜辣素在小鼠血液中药动学及组织分布

3.1 药品、试剂与仪器

3.2 方法与结果

3.3 讨论

小结

致谢

参考文献

综述:药物肝微粒体体外代谢及H2S供体药物代谢途径

攻读硕士学位期间发表的学术论文

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