传统中药姜黄提取物姜黄素对人结肠癌耐药细胞株HCT-8/5-Fu耐药逆转作用及机制研究

摘要

目的：本试验旨在通过姜黄素联合5-Fu（5-氟尿嘧啶）分别作用于人结肠癌HCT-8细胞株及HCT-8/5-Fu细胞株，探讨姜黄素对人结肠癌耐药细胞株HCT-8/5-Fu耐药的逆转作用。
　　方法：通过细胞复苏、细胞传代、细胞冻存掌握细胞培养基本操作方法，绘制人结肠癌HCT-8细胞及HCT-8/5-Fu的细胞生长曲线，应用CCK-8法测定姜黄素、5-Fu对HCT-8细胞株及其耐药株的细胞毒性，通过5-Fu与姜黄素药物联合用药计算出对 HCT-8/5-Fu耐药株的耐药倍数及逆转倍数。了解姜黄素与5-Fu联用对于HCT-8敏感株及耐药株的协同作用，用流式细胞仪检测姜黄素与5-Fu对HCT-8敏感株及耐药株细胞周期及细胞凋亡的影响，在透射电镜下观察姜黄素与5-Fu对HCT-8敏感株及耐药株细胞超微结构的影响，促进细胞凋亡，通过实时荧光定量PCR（聚合酶链式反应）实验及Westernblot检测BCL2、Survivn、P-gp、HSP-27等目的基因的表达，采用SPSS20.0统计软件进行分析，定量资料应用单因素方差分析，实验数据以x?s表示，P<0.05有统计学意义。
　　结果：（1）姜黄素与5-Fu联用对于HCT-8敏感株及耐药株作用，表现在对于HCT-8敏感株及耐药株，姜黄素与5-Fu联用均表现出协同作用。（2）用流式细胞仪检测出不同剂量的姜黄素与5-Fu干预敏感株及耐药株细胞后，G0/G1期细胞数显著增加，S+G2/M期细胞数显著减少，细胞周期阻滞在 G0/G1并促使细胞凋亡，随着药物浓度的增加，细胞株凋亡率逐渐升高，呈明显的浓度依赖性关系。（3）在透射电镜下见发生凋亡的细胞外形不规则，胞质会有大空泡形成，核染色质凝聚，核质逐渐脱落于胞质内或细胞外成为凋亡小体，细胞表面的微绒毛减少或消失，线粒体模糊，符合细胞凋亡表现。（4）各组干预药物的改变，目的基因（BCL2、Survivin、P-gp、HSP-27）的相对表达量逐渐减少，呈剂量依赖性，与对照组相比，差异具有统计学意义(P<0.05)。
　　结论：姜黄素具有逆转人结肠癌HCT-8/5-Fu细胞株耐药性的作用，可能与下调相关基因蛋白BCL2、Survivin、P-gp、HSP-27的表达有关。

目录

声明

中英文缩略词对照表

前言

内容与方法

1 材料

2 研究方法

3 统计方法

4 技术路线图

结果

1 人结肠癌HCT-8细胞，人结肠癌HCT-8/5-Fu细胞生长曲线图的绘制

2 通过姜黄素对人结肠癌HCT-8细胞，人结肠癌HCT-8/5-Fu细胞耐药株细胞毒性的CCK-8检测绘制其抑制效应曲线

3 通过5-Fu对人结肠癌HCT-8细胞，人结肠癌HCT-8/5-Fu细胞耐药株细胞毒性的CCK-8检测绘制其抑制效应曲线

4 通过姜黄素的两个非细胞毒性剂量（ 4μ g/ml和5.5μ g/ml）分别与5-Fu联用计算人结肠癌HCT-8/5-Fu耐药细胞株的耐药逆转倍数

5 通过计算 q 值检测 5-Fu 与不同浓度的姜黄素联合对人结肠癌HC T-8细胞，人结肠癌HCT-8/5-Fu耐药株的协同作用

6 通过流式细胞术检测姜黄素与5-Fu对人结肠癌HCT-8细胞，人结肠癌HCT-8/5-Fu耐药株细胞周期的影响

7 通过流式细胞术检测姜黄素与5-Fu对人结肠癌HCT-8细胞，人结肠癌HCT-8/5-Fu耐药株细胞凋亡的影响

8 通过透射电镜检测姜黄素与5-Fu对人结肠癌HCT-8细胞，人结肠癌HCT-8/5-Fu耐药株细胞超微结构的影响

9 通过荧光实时定量 PCR 检测姜黄素与 5-Fu对人结肠癌 HCT-8细胞，人结肠癌HCT-8/5-Fu耐药株细胞BCL2、Survivin、P-gp、HSP-27表达的影响

10 通过 Westernblot检测姜黄素与5-Fu对人结肠癌 HCT-8/5-Fu耐药株细胞BCL2、Survivin、P-gp、HSP-27表达的影响

讨论

小结

致谢

参考文献

综述:姜黄素逆转多药耐药的研究进展

攻读硕士学位期间发表的学位论文

个人简历

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